cDNAマイクロアレイを用いた抗癌剤耐性関連遺伝子の検討

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14571225
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 久保田 哲朗 慶應義塾大学, 医学部, 助教授 (00118944)
• Keywords: CDNAマイクロアレイ / 胃癌 / クラスタリング / 抗癌剤感受性 / MTTアッセイ / 耐性関連遺伝子 / mRNA

Research Abstract

(1)細胞株による検討
我々の所有する数種類の大腸癌細胞株(WiDr,HT-29,HCT-15,Colo201,Colo205)を用いて,これら細胞株の3,4-(5-methylthiazolyl-2-yl)tetrazolium bromide(MTT)アッセイの結果とDNAマイクロアレイによる遺伝子発現プロファイルの結果を比較した。この結果,cisplatin (CDDP)および5-Fluorouracil(5-FU)に対する耐性候補遺伝子としてcyclooxygenase(COX)-2が抽出された。
(2)RT-PCRによる検討
上記によって抽出された抗癌剤耐性候補遺伝子COX-2 cDNAプラスミドをHT-29大腸癌細胞株より抽出し,電気穿孔法によりCOX-2 naiveなHCT-15株にtransfectした。transfectant(TR-5)の培養上清にはCOX-2の産生するprostagrandin E2が確認され,細胞にはCOX-2 mRNAとCOX-2蛋白の発現が認められた。MTTアッセイを用いた検討では,COX-2を導入されたtransfectant(TR-5)は親株に比して5-FUおよびCDDPに対する耐性を獲得していた。affymetrix社製oligonucleotide arrayを用い,transfectant(TR-5)および親株(HCT-15)の発現プロファイルを比較検討したところ,transfectantにおいてはmultidrug resistant protein-1(MRP),thymidylate synthetase(TS)のup-regulationが観察され,これらの遺伝子がCOX-2の下流で5-FU(TS)およびCDDP(MRP-1)に対する耐性発現に関与していることが示唆された。

Research Products

• [Publications] 久保田哲朗: "抗癌剤感受性試験-細胞生物学的・分子生物学的手法"医薬ジャーナル. 39(3). 55-61 (2003)
• [Publications] Kubota, T., et al.: "Cancer chemotherapy chemosensitivity testing is useful in evaluating the appropriate adjuvant cancer chemotherapy for stages III/IV gastric"Anticancer Research. 23. 583-588 (2003)
• [Publications] 久保田哲朗: "胃癌肝転移化学療法における抗癌剤感受性試験"臨床外科. 58(6). 789-792 (2003)
• [Publications] Kubota, T.: "Is gastric cancer decreasing?"Japan Medical Association Journal. 46(6). 246-250 (2003)
• [Publications] Kubota, T.: "5-Fluorouracil and dihydropyrimidine dehydrogenase"International Journal of Clinical Oncology. 8. 127-131 (2003)
• [Publications] 久保田哲朗: "消化器癌の化学療法;今できる方法は何か?効果予測因子,有害事象予測因子"消化器外科. 26(9). 1393-1399 (2003)