COCH遺伝子プロモーターを用いた新たな内耳特異的遺伝子治療法の開発

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14571644
• Research Institution: Nippon Medical School
• Principal Investigator: 池園 哲郎 日本医科大学, 医学部, 講師 (80277491)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 渡邊 淳 日本医科大学, 医学部, 助手 (10307952)
• Keywords: COCH遺伝子 / 内耳特異的 / 遺伝子治療 / Cochlin / アイソフォーム

Research Abstract

本年度の研究目的は、COCH遺伝子発現の発生過程の時期特異性の検討である。
ヒトは胎生20〜25週で内耳はほぼ成人と同様の形態となるが、マウスやラットの内耳は出生直後まだ未成熟であり、生後10〜14日頃に完成することが知られている。今回はすべての抗Cochlinアイソフォーム特異的抗体の中でも、p63,44,40の全てのアイソフォームを認識する抗体(anti-vWF-A1 antibody, antigenic peptide;19-mer(KADIAFLIDGSFNIGQRRF)residues 163-181 in the vWF-A1 domain of Cochlin)を用い、ラットの蝸牛におけるCOCH蛋白の発現を生後3日目から成獣まで比較する免疫組織学的研究を行なった。
使用動物;ウィスターラット、それぞれ生後3日目、6日目、10日目、24日目および成獣のラットを使用した。
方法;固定は4%パラフォルムアルデヒドで(一晩)し、10%EDTAで脱灰処理を行なった(3〜5日)。パラフィン包埋したブロックを作成、2μmの薄切切片を作成した。anti-vWF-A1 antibodyを1次抗体としてABC法(DABによる発色)で免疫染色を行なった。
結果;染色は主にラセン板縁およびラセン靭帯に認められた。コルチは弱く、ラセン神経節、血管条は染色されなかった。またラセン板縁は成長を通じ、染色の強さはあまり変わらなかったが、ラセン靭帯は24日以降の内耳で強く染まるようになった。また基底回転ほど濃く染色された。ラセン板縁、ラセン靭帯が染色されるという結果は従来の報告にあるDFNA9患者の側頭骨病理での変性部位と同様であり、やはりDFNA9の発症においてラセン板縁、ラセン靭帯が重要な箇所であると考えられた。
今後COCH遺伝子の発現特異性を担うプロモーター領域の解析を行う。

Research Products

• [Publications] Ikezono T et al.: "Identification of a novel Cochlin isoform in the perilymph : insights to Cochlin function and the pathogenesis of DFNA9."Biochem Biophys Res Commun.. 314(2). 440-446 (2004)
• [Publications] 池園哲郎: "めまい・難聴遺伝子COCHのプロテオーム解析"Equiliburium Res. vol.61(1). 47-53 (2002)
• [Publications] 池園哲郎: "メニエール病と遺伝子治療"Equiliburium Res. vol.62(2). 112-116 (2003)
• [Publications] 池園哲郎, 新藤晋ら: "外リンパ中のCOCHLIN-Tomoprotein(CTPの基礎と臨床応用)"厚生労働省特定疾患対策研究事業 前庭機能異常に関する調査研究班. 平成14年度報告書. 73-76 (2002)