骨延長術における骨代謝調節因子遺伝子導入による骨延長期間への影響に関する研究

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14571924
• Research Institution: Kanazawa Medical University
• Principal Investigator: 藤村 和磨 金沢医科大学, 医学部, 助教授 (30252399)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 瀬上 夏樹 金沢医科大学, 医学部, 教授 (40148721) ; 金山 景よう 金沢医科大学, 医学部, 助手 (50329380)
• Keywords: rhBMP-2 / アデノウイルスベクター / 骨延長術

Research Abstract

平成14年度は,従来われわれが使用してきた非増殖性アデノウイルスベクター(COS-TPC法により作製)の増殖と精製を行った.
(1)高力価ウイルス液の作製,精製と力価測定.in vitro検定.
インサートに組み込んだコスミドベクターと親ウイルスDNA-TPCを293細胞(ヒト胎児腎細胞株)にリン酸カルシウム法でco-transfectし,得られたウイルス液をさらに293細胞で3回継代し,8.75x10^8plaque forming unit(PFU)/mlの高力価ウイルス液を得た.そしてマウス,ヒト筋芽細胞を用い,BMP-2アデノウイルスベクターを感染させ,BMP MOI-20でALP-activityが1.3+/-0.4IU/mg proteinにまで上昇することを確認した.一方,コントロールのLacZ MOI20ではALP-activityの上昇はおこらなかった.
(2)in vivo検定
BMP-2アデノウイルスベクターについては,免疫抑制下にラット下腿筋肉内に注入して骨誘導を確認した.その結果,X線学的および組織学的検査で異所性骨誘導が認められた.
このウイルス液(8.75x10^8plaque forming unit(PFU)/ml)を用いて,平成15年度は,実験的骨延長術に用いる予定である.

Research Products

• [Publications] Fujimura K, Segami N, et al.: "The effect of fibroblast growth factor-2 to osteoinducing activity by recombinant human bone morphogenetic protein-2 in rat muscle"Arch Oral Biol.. 47(8). 577-584 (2002)
• [Publications] Fujimura K, et al.: "Expression of bone morphogenetic protein-2 in the course of osteoinduction by recombinant human bone morphogenetic protein-2"Clin Oral Impl Res.. 13. 80-85 (2002)
• [Publications] Fujimura K, et al.: "Osteoinduction by recombinant human bone morphogenetic protein-2 in muscles of non-human primates"J Int Med Res.. 30(3). 251-259 (2002)
• [Publications] Suzuki T, Fujimura K, Segami N, et al.: "Regeneration of defects in the articular cartilage in rabbit temporomandibular joints by bone morphogenetic protein-2"Br J Oral Maxillofac Surg.. 40(3). 201-206 (2002)