2002 Fiscal Year Annual Research Report
新規がん多剤耐性克服物質の探索と薬剤排出膜蛋白の機能解析
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14572004
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
青木 俊二 大阪大学, 薬学研究科, 講師 (60252699)
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| Keywords | がん多剤耐性 / P-glycoprotein / MRP1 / agosterol A / 光親和性標識 |
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| Research Abstract |
1)^3Hラベルした抗がん剤を用いて、P-gpを過剰発現するKB-C2株とMRP1を過剰発現するKB-CV60株における細胞内の抗がん剤蓄積量および細胞外への抗がん剤排出に対するagosterol Aの作用を検討し、agosterol Aが細胞外への抗がん剤排出を抑制して細胞内の抗がん剤蓄積量を回復することを明らかにした。また、両耐性株から調製した膜画分を用いて薬剤排出膜蛋白質に対するagosterol Aの直接作用を検討し、agosterol Aが、これら膜タンパク質に直接作用してその機能を阻害していることを明らかにした。
2)agosterol Aの構造活性相関研究を行い、分子内の3個のアセチル基と2個の水酸基が活性発現に重要であることを明らかにした。また、^<125>Iとアジド基を有する光親和性補助基を11位および22位水酸基に5炭素のリンカーを介して結合させた2種のラジオアイソトープ光親和性プローブを設計・合成することに成功した。
3)2)で合成した光親和性プローブを用いてP-gpおよびMRP1に対する標織実験を行った結果、11位水酸基に光親和性補助基を結合させたプローブは、P-gpおよびMRP1を効率よく標識できたが、22位水酸基に光親和性補助基を結合させたプローブは、P-gpにもMRP1にも親和性を示さなかった。また、本プローブは、MRP1の標識において、MRP1の基質輸送の際に必須であるグルタチオンの存在下のみにMRP1を標識できるという優れた適択性も有していることが明らかになった。さらに、本プローブを用いてMRP1を標識後、限定加水分解し、分解物をSDS-PAGEで分離解析した結果、本プローブの結合部位は、MRP1のC末端側に存在することが判明した。
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[Publications] Shunji Aoki et al.: "Reversing Effect of Agosterol A, a Spongean Sterol Acetate, on Multidrug Resistance in Human Carcinoma Cells"Jpn. J. Cancer Res.. 92. 886-895 (2001)
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[Publications] Shunji Aoki et al.: "Brianthein A, a novel briarane-type diterpene reversing multidrug resistance in human carcinoma cell line, from the gorgonian Briareum excavatum"Tetrahedron. 57. 8951-8957 (2001)
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[Publications] Zhe-Sheng Chen, Shunji Aoki et al.: "Reversal of drug resistance mediated by multidrug resistance protein (MRP) 1 by dual effects of agosterol a on MRP1 function"International Journal of Cancer. 93. 107-113 (2001)
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[Publications] Xiao-Qin Ren, Shunji Aoki et al.: "Glutathione (GSH) Dependent Binding of a Photoaffinity Analog of Agosterol A on the C-terminal Half of Human Multidrug Resistance Protein (MRP1)"J. Biol. Chem. 276. 23197-23206 (2001)
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[Publications] Xiao-Qin Ren, Shunji Aoki et al.: "A Positively Charged Amino Acid Proximate to the C-terminus of TM17 of MRP1 is Indispensable for GSH-dependent binding of Substrates and for Transport of LTC4"Biochemistry. 41. 14132-14140 (2002)
