2003 Fiscal Year Annual Research Report

DNAマイクロアレーを用いた新たな抗アポトーシス関連分子の探索

Research Project

Project/Area Number	14572066
Research Institution	KYORITSU WOMEN'S UNIVERSITY
Principal Investigator	笠原忠共立薬科大学, 薬学部, 教授 (60049096)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	横田恵理子共立薬科大学, 薬学部, 助手 (10222457) 園田よし子共立薬科大学, 薬学部, 助教授 (30050743)
Keywords	抗アポトーシス / 接着班キナーゼ(FAK) / DNAマイクロレー / シグナル分子 / HL-60 / 2次元電気泳動 / レドックス制御
Research Abstract	我々はこれまでに,ヒト白血球細胞株HL-60が酸化ストレスや放射線照射により容易にアポトーシスにより細胞死に至るが、これに接着班キナーゼFAKのcDNAを導入した細胞株HL-60/FAKはアポトーシスに対して,高度に抵抗を示すことを明らかにしてきた。FAKを高発現するグリオーマ細胞株などは,抗がん剤に耐性を示すことが知られている。そこでFAKによって誘導される抗アポトーシス機構を解析する為に、FAKならびに変異体を導入した細胞株を樹立し,種々の抗アポトーシスタンパク質ならびに抗酸化ストレスタンパク質の解析をめざした.方法としては,DNAマイクロアレーによる発現遺伝子の解析ならびに2次元電気泳動による発現タンパク質を同定することを試みてきた. すなわち,1.DNAマイクロアレー法によりFAK導入細胞においてはとくに、細胞周期(cdcキナーゼ,サイクリンなど)やシグナル伝達(MAPキナーゼ,TRAFファミリー,c-Relファミリーなど)に関与する分子種の発現上昇が認められた。これらの遺伝子の発現はさらに,RT-PCR法ならびにウエスタンブロットなどにより確認された. 2.2次元電気泳動法とLC/MS, TOF/MSによる解析により、上記遺伝子のほか、HSP90やタンパク質合成に関わる分子、レドックス制御に関わる分子などの発現上昇を認めた。さらに,これらのタンパク質の発現上昇とmRNA発現との関連,また,これらの分子群の抗アポトーシス作用に果たす役割を明らかにすることができた. 本研究において,アポトーシスと抗アポトーシスに関与するタンパク質の新たな相互作用を明らかにすることができ,今後in vivoでの応用を目指したい.

Research Products

(10 results)

All Other

All Publications (10 results)

[Publications] Funakoshi-Tago M, Sonoda Y, Kasahara T, et al.: "TNFα-induced NF-κB activation is impaired in the focal adhesion kinase (FAK)-deficient fibroblasts : Essential role of FAK in TNFα-induced NF-κB activation."J Biol Chem. 278(31). 29359-29365 (2003)
[Publications] Makuta Y, Sonoda Y, Kasahara T, et al.: "IL-10-induced CCR5 expression in macrophage-like HL-60 cells : Involvement of Frk1/2 and STAT3."Biol Pharm Bull. 26(8). 1076-1081 (2003)
[Publications] Yamamoto D, Sonoda Y, Kasahara T, et al.: "FAK overexpression upregulates cyclin D3 and enhances cell proliferation via the PKC and PI3-kinase-Akt pathways"Cell Signaling. 15(6). 575-583 (2003)
[Publications] Watanabe H, Kasahara T, Suzuki K, et al.: "Triphenyltin enhances the neutrophilic differentiation of promyelocytic HL-60 cells."Biochem Biophys Res Commun. 306(1). 26-31 (2003)
[Publications] Tago K, Sonoda Y, Tominaga S, Kasahara T, et al.: "TRAF6 and C-SRC induce synergistic AP-1 activation via PI3-kinase-AKT-JNK pathway."Eur J Biochem. 270(6). 1257-1268 (2003)
[Publications] Dong H, Toyoda N, Kasahara T, et al.: "Gene expression profile analysis of the mouse liver during bacteria-induced fulminant hepatitis by a cDNA microarray system"Biochem Biophys Res Commun. 298(5). 675-686 (2002)
[Publications] Oda T, Ueda A, Shimizu N, Handa H, Kasahara T: "Suppression monocyte chemoatractant protein 1, but not IL-8, by alprazolam : effect of alprazolam on c-Rel/p65 and c-Rel/p50 binding to the monocyte chemoattractant"J Imunol. 169. 3329-3335 (2002)
[Publications] Kasahara T, Yokota E, Sonoda Y, et al.: "Antiapoptotic action of focal adhesion kinase (EAK) against ionizing radiation."Antioxid Redox Signal. 4(3). 491-499 (2002)
[Publications] Sakurai S, Sonoda Y, Koguchi, E, Shinoura N, Hamada H, Kasahara T: "Mutated focal adhesion kinase induces apoptosis in a human glioma cell, T98G."Biochem Biophys Res Commun. 293(1). 174-181 (2002)
[Publications] Matsui S, Matsumoto S, Kasahara T, Suzuki K, et al.: "LIM kinase 1 modulates opsonized zymosan-triggered activation of macrophage-like U937 cells Possible involvement of phosphorylation of cofilin and reorganization of"J Biol Chem. 277(1). 544-549 (2002)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

DNAマイクロアレーを用いた新たな抗アポトーシス関連分子の探索

Principal Investigator

笠原 忠 共立薬科大学, 薬学部, 教授 (60049096)

Research Products

[Publications] Funakoshi-Tago M, Sonoda Y, Kasahara T, et al.: "TNFα-induced NF-κB activation is impaired in the focal adhesion kinase (FAK)-deficient fibroblasts : Essential role of FAK in TNFα-induced NF-κB activation."J Biol Chem. 278(31). 29359-29365 (2003)

[Publications] Makuta Y, Sonoda Y, Kasahara T, et al.: "IL-10-induced CCR5 expression in macrophage-like HL-60 cells : Involvement of Frk1/2 and STAT3."Biol Pharm Bull. 26(8). 1076-1081 (2003)

[Publications] Yamamoto D, Sonoda Y, Kasahara T, et al.: "FAK overexpression upregulates cyclin D3 and enhances cell proliferation via the PKC and PI3-kinase-Akt pathways"Cell Signaling. 15(6). 575-583 (2003)

[Publications] Watanabe H, Kasahara T, Suzuki K, et al.: "Triphenyltin enhances the neutrophilic differentiation of promyelocytic HL-60 cells."Biochem Biophys Res Commun. 306(1). 26-31 (2003)

[Publications] Tago K, Sonoda Y, Tominaga S, Kasahara T, et al.: "TRAF6 and C-SRC induce synergistic AP-1 activation via PI3-kinase-AKT-JNK pathway."Eur J Biochem. 270(6). 1257-1268 (2003)

[Publications] Dong H, Toyoda N, Kasahara T, et al.: "Gene expression profile analysis of the mouse liver during bacteria-induced fulminant hepatitis by a cDNA microarray system"Biochem Biophys Res Commun. 298(5). 675-686 (2002)

[Publications] Oda T, Ueda A, Shimizu N, Handa H, Kasahara T: "Suppression monocyte chemoatractant protein 1, but not IL-8, by alprazolam : effect of alprazolam on c-Rel/p65 and c-Rel/p50 binding to the monocyte chemoattractant"J Imunol. 169. 3329-3335 (2002)

[Publications] Kasahara T, Yokota E, Sonoda Y, et al.: "Antiapoptotic action of focal adhesion kinase (EAK) against ionizing radiation."Antioxid Redox Signal. 4(3). 491-499 (2002)

[Publications] Sakurai S, Sonoda Y, Koguchi, E, Shinoura N, Hamada H, Kasahara T: "Mutated focal adhesion kinase induces apoptosis in a human glioma cell, T98G."Biochem Biophys Res Commun. 293(1). 174-181 (2002)

[Publications] Matsui S, Matsumoto S, Kasahara T, Suzuki K, et al.: "LIM kinase 1 modulates opsonized zymosan-triggered activation of macrophage-like U937 cells Possible involvement of phosphorylation of cofilin and reorganization of"J Biol Chem. 277(1). 544-549 (2002)

笠原忠共立薬科大学, 薬学部, 教授 (60049096)