ポリグルタミン病の変異蛋白質分解に関する分子機構の解明

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14580724
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 山田 光則 新潟大学, 脳研究所, 助教授 (30240039)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高橋 均 新潟大学, 脳研究所, 教授 (90206839)
• Keywords: ポリグルタミン / マウス / 下オリーブ核肥大 / 遺伝子発現

Research Abstract

1 下オリーブ核肥大反応の実験的作成(山田、高橋):C57BL正常マウス(生後15週)20匹を対象として片側下オリーブ核肥大の実験的作成を行った。ケタラールによる深麻酔下にマウスの後頭部を正中で皮切後、バイポーラ凝固装置(AESCULAP社)で止血しつつ後頭部の筋を剥離し、後頭骨左側半分を露出した。歯科用ドリル(モリタ製作所)で後頭骨に径約2mmの小孔を開け、バイポーラ凝固装置で左小脳深部(小脳核)を凝固した。術野を消毒後、皮膚を縫合し、マウスをマウス用ケージ内で自由行動にて飼育した。手術による神経症状は認められなかった。
2 核酸抽出と発現遺伝子解析用試料の作製(山田):手術4週後、麻酔薬の過剰投与によってマウスを安楽死させ、脳を摘出した。実体顕微鏡(OLYMPUS社)下に延髄を切り出し、正中断にて下オリーブ核肥大側と対側の2種の試料を収集した。各試料からtotal RNA(ISOGEN使用、Nippon Gene社)を抽出、RNeasy mini kit(QIAGEN社)を用いてtotal RNAを精製した。T7-(dT)24 Primerを用い逆転写反応でdouble strand cDNAを作製し、精製後、BioArray HighYield RNA Transcript Labeling Kit(ENZO社)を用いてビオチン標識cRNAを作製した。
3 発現遺伝子解析(山田、高橋):ビオチン標識cRNAを断片化した後、マウス遺伝子発現解析用プローブアレイ(GeneChip、Affymetrix社)にハイブリダイズした。ストレプトアビジンーフィコエリスリンを反応させた後、GeneChip核酸解析システム(Affymetrix社)を用いて発現遺伝子を解析中である。

Research Products

• [Publications] Yamada M.: "Involvement of lysosomes in the pathogenesis of CAG-repeat diseases"Annals of Neurology. 52. 498-503 (2002)
• [Publications] Yamada M.: "Oligodendrocytic polyglutamine pathology in dentatorubral-pallidoluysian atrophy"Annals of Neurology. 52. 670-674 (2002)
• [Publications] Ishikawa A.: "Dementia and delirium in four patients with Machado-Joseph disease"Archives of Neurology. 59. 1084-1088 (2002)
• [Publications] Yamada M.: "Genotype-phenotype correlation in CAG-repeat diseases"Neuropathology. 22. 317-322 (2002)
• [Publications] 山田 光則: "ポリグルタミンの病理学"神経研究の進歩. 46・5. 627-636 (2002)