温度反応性培養皿を用いた角膜内皮細胞の培養および内皮移植の検討

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14580827
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 山上 博子 自治医科大学, 医学部, 講師 (50216686)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大和 雅之 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (40267117)
• Keywords: 培養角膜内皮細胞 / 角膜内皮細胞移植 / マウス / ラット

Research Abstract

角膜内皮細胞は、角膜の透明性を維持するために、極めて重要な組織であるが、生体内では増殖をしない。内皮細胞が障害されると、角膜の透明性は損なわれ視力が失われる。我が国では、移植角膜が不足しており、培養角膜内皮が角膜移植に応用されれば、角膜内皮変性症、角膜内皮炎ほか、多くの角膜疾患患者に福音をもたらすものと考えられる。今回我々は角膜内皮細胞シートの開発、将来の移植応用実験を目的として、まず実験動物を用いて培養条件の検討を行った。
マウス、ラットから新鮮角膜を採取し、内皮細胞培養条件の検討を行ったP。近年狂牛病など人畜共通感染症の発症が問題となっているため、ウシ血清は用いず、マウスでは無血清培地、ラットでは無血清培地、または自己(同種)血清添加培地による内皮細胞培養を試みた。
ウシ胎児血清を加えなくても、其々内皮細胞の培養は可能であった。しかし、マウスでは、角膜上皮や実質と内皮細胞の分離が困難であり、特に角膜実質からの繊維芽細胞が培養内皮細胞中に混入して、内皮細胞単一のシート作製が困難な状態である。ラットにおいても同様に、培養角膜内皮細胞に繊維芽細胞が混入する部分が多く、シート作成の障害となっている。これは、角膜内皮細胞の基底膜であるデスメ膜と、実質組織の接着がヒトの場合より強固なためと、眼組織のサイズが小さく、分離操作が難しいためと考えた。
今後は、過去に角膜内皮細胞培養が報告されている、ウサギなど、大型動物を用いた角膜内皮細胞培養シートの作成も検討してゆきたい。