2002 Fiscal Year Annual Research Report

てんかん原性皮質形成異常におけるCI^-ホメオスタシスとGABA機能異常の分子機構

Research Project

Project/Area Number	14657229
Research Institution	Hamamatsu University School of Medicine
Principal Investigator	福田敦夫浜松医科大学, 医学部, 教授 (50254272)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	山田順子静岡大学, 大学院・電子科学研究科, 助手 (30334965) 清水千草浜松医科大学, 医学部, 特別研究員(PD)
Keywords	クロライドイオン / クロライドトランスポーター / カハールレチウス細胞 / 細胞移動 / GABA / 皮質形成異常 / てんかん / リーリン
Research Abstract	1.てんかん原性皮膚形成異常組織標本におけるCl^-トランスポーター遺伝子発現の解析(清水、Luhmann): ヒトのCl^-トランスポーターKCC2、NKCC1及び細胞移動関連遺伝子reelinのmRNAのオリゴcDNAプローブを合成した。外科手術により摘出された皮質形成異常組織を凍結保存して浜松医大に送り、超薄切片を作成して上記オリゴcDNAプローブとハイブリダイズさせ、in situ hybridization法を用いてこれらCl^-トランスポーターとreelin mRNAの発現状態を解析した。ヒトてんかん原性皮質形成異常(異形成)組織では皮質は層構造を呈さずNKCC1の発現増加もなかった。形成異常組織に特徴的な巨大細胞のKCC2発現は正常部位と同程度であったが、その周囲の小型細胞では発現が減少しており、異形成組織におけるCl^-調節の異常が示唆された。またreelin発現量は著しく低下していた。これらは皮質凍結損傷モデル動物の所見とは異なっており、別の病態であると考えられた。 2.てんかん原性皮膚形成異常組織切除標本を用いた新鮮脳スライス標本の作成法の確立(福田、山田): 我々が独自に開発したsucrose Ringer法(高浸透圧-無Caあるいは等浸透圧-低NaCl)を用いることにより、ラットの実験系では通常の方法より格段に健常な脳スラィス標本を得ることができる。この方法をヒト摘出組織にも応用した。国立静岡神経医療センターの外科手術に立ち会い、皮質形成異常組織を摘出後、直ちに氷冷したsucrose Ringer液に浸し、ビブラトームで厚さ400μmのスライスを作成した。近赤外光微分干渉顕微鏡により皮質形成異常組織の神経細胞を生きた状態で形態観察したが、生存細胞の数が少なくスライスの状態は悪かった。組織にラジカルスカベンジャーやグルタミン酸阻害剤等を加えアガロースで包埋し、ビブラトームを改良するなど、さらに至適条件を模索する必要があると考えられた。

Research Products

(11 results)

All Other

All Publications (11 results)

[Publications] Farkas, I. et al.: "CD59 blocks not only the insertion of C9 into MAC but inhibits ion channel formation of homologous C5b-8 as well as C5b-9"J. Physiol.. 539. 537-545 (2002)
[Publications] Ueno, T. et al.: "Diversity of neuron-specific K^+-Cl^-cotransporter expression and inhibitory postsynaptic potential depression in rat moloneutrons"J. Biol. Chem.. 277. 4945-4950 (2002)
[Publications] Nabekura, J. et al.: "Reduction of KCC2 expression and GABA_A receptor-mediated excitation after in vivo axonal injury"J. Neurosci.. 22. 4412-4417 (2002)
[Publications] Kilb, W. et al.: "Depolarizing glycine responses in Cajal-Retzius cells of neonatal rat cerebral cortex"Neuroscience. 112. 299-307 (2002)
[Publications] Mikawa, S. Et al.: "Developmental changes in KCC1, Kcc2, and NKCC1 mRNAs in the rat cerebellum"Dev. Brain Res.. 136. 930-1000 (2002)
[Publications] Okabe, A. et al.: "Amygdata kindling induces upregulation of mRNA for NKCC1, a Na^+,K^+,-2Cl^-cotransporter, in the rat piriform cortex"Neurosci. Res.. 44. 225-229 (2002)
[Publications] Wang.C.et al.: "Developmental changes in KCC1, KCC2, and NKCC1 mRNA expressions in the rat brain"Dev. Brain Res.. 139. 59-66 (2002)
[Publications] Shimizu-Okabe, C. et al.: "Layer-specific expression of Cl^-transporters and differential [Cl^-]_i in newborn rat cortex"Neuroreport. 13. 2433-2437 (2002)
[Publications] Toyoda, H. et al.: "Induction of NMDA and GABA_A receptors-mediated Ca^<2+> oscillations with KCC2 mRNA downregulation in injured facial motoneurons"J. Neurophysiol.. 89. 1353-1362 (2003)
[Publications] Takeuchi, K.: "Effect of urinary trypsin inhibitor on potassium currents : fetus modulates membrane excitability by production of UTI"Acta Obstet. Gynecol. Scand.. (in press). (2003)
[Publications] 福田敦夫他(分担): "脳機能の解明-生命科学の主潮流-(赤池紀扶,他編)"ガイア出版会. 570 (2002)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

てんかん原性皮質形成異常におけるCI^-ホメオスタシスとGABA機能異常の分子機構

Principal Investigator

福田 敦夫 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50254272)

Research Products

[Publications] Farkas, I. et al.: "CD59 blocks not only the insertion of C9 into MAC but inhibits ion channel formation of homologous C5b-8 as well as C5b-9"J. Physiol.. 539. 537-545 (2002)

[Publications] Ueno, T. et al.: "Diversity of neuron-specific K^+-Cl^-cotransporter expression and inhibitory postsynaptic potential depression in rat moloneutrons"J. Biol. Chem.. 277. 4945-4950 (2002)

[Publications] Nabekura, J. et al.: "Reduction of KCC2 expression and GABA_A receptor-mediated excitation after in vivo axonal injury"J. Neurosci.. 22. 4412-4417 (2002)

[Publications] Kilb, W. et al.: "Depolarizing glycine responses in Cajal-Retzius cells of neonatal rat cerebral cortex"Neuroscience. 112. 299-307 (2002)

[Publications] Mikawa, S. Et al.: "Developmental changes in KCC1, Kcc2, and NKCC1 mRNAs in the rat cerebellum"Dev. Brain Res.. 136. 930-1000 (2002)

[Publications] Okabe, A. et al.: "Amygdata kindling induces upregulation of mRNA for NKCC1, a Na^+,K^+,-2Cl^-cotransporter, in the rat piriform cortex"Neurosci. Res.. 44. 225-229 (2002)

[Publications] Wang.C.et al.: "Developmental changes in KCC1, KCC2, and NKCC1 mRNA expressions in the rat brain"Dev. Brain Res.. 139. 59-66 (2002)

[Publications] Shimizu-Okabe, C. et al.: "Layer-specific expression of Cl^-transporters and differential [Cl^-]_i in newborn rat cortex"Neuroreport. 13. 2433-2437 (2002)

[Publications] Toyoda, H. et al.: "Induction of NMDA and GABA_A receptors-mediated Ca^<2+> oscillations with KCC2 mRNA downregulation in injured facial motoneurons"J. Neurophysiol.. 89. 1353-1362 (2003)

[Publications] Takeuchi, K.: "Effect of urinary trypsin inhibitor on potassium currents : fetus modulates membrane excitability by production of UTI"Acta Obstet. Gynecol. Scand.. (in press). (2003)

[Publications] 福田敦夫他(分担): "脳機能の解明-生命科学の主潮流-(赤池紀扶,他 編)"ガイア出版会. 570 (2002)

福田敦夫浜松医科大学, 医学部, 教授 (50254272)

[Publications] 福田敦夫他(分担): "脳機能の解明-生命科学の主潮流-(赤池紀扶,他編)"ガイア出版会. 570 (2002)