幹細胞を用いた生殖腺細胞への分化誘導とそのメカニズムの解明

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14657263
• Research Institution: 福井医科大学
• Principal Investigator: 宮本 薫 福井医科大学, 医学部, 教授 (30125877)
• Keywords: 細胞分化 / ステロイドホルモン / 顆粒膜細胞

Research Abstract

卵巣顆粒膜細胞との共培養系を用いて、幹細胞から卵巣夾膜細胞への分化誘導を行い、in vitro分化誘導系を確立した。
コラーゲン膜を介して片面に卵巣顆粒膜細胞を、反対の面に幹細胞を共培養し、培養メディウムにFSHをはじめとする各種ホルモンを加えることで、幹細胞から卵巣夾膜細胞への分化を誘導した。分化誘導には分化度の異なる3種類の幹細胞、(1)全能性をもつ胚性幹細胞、(2)多能性を有する間葉系幹細胞、(3)夾膜細胞の前駆細胞と考えられている卵巣間質幹細胞、をそれぞれ用いて検討を行った。分化誘導は、夾膜細胞に特異的なアンドロステンジオンの産生とLH受容体遺伝子の発現を指標とする。分化誘導の際、卵巣夾膜細胞への運命決定に関わる転写因子(群)の候補をピックアップした。
幹細胞から卵巣夾膜細胞への最終分化の過程ではさまざまな転写因子が協調して分化が進行すると考えられる。本研究では、卵巣夾膜細胞への運命決定に関わる転写因子(群)を同定する事が大きな目的である。
共培養系で分化誘導された夾膜細胞と単独培養系で未分化のままの幹細胞をそれぞれコラーゲン膜から剥がし取りmRNAを抽出したのち、夾膜細胞への分化誘導の際に発現してきた遺伝子のみからなるcDNAライブラリーをサブトラックションクローニングにより作成した。ライブラリーから約5000クローンを単離しDNAマイクロアレイ及び塩基配列の解析を行い、これらのクローンの中から、幹細胞から卵巣夾膜細胞への運命決定に関わる転写因子(群)の候補をピックアップした。

Research Products

• [Publications] Satoh, T.: "Activation of peroxisome proliferator-activated receptor-γ stimulates the growth arrest and DNA-damage inducible 153 gene in non-small cell lung carcinoma cells"Oncogene. 21. 2171-2180 (2002)
• [Publications] Yoshino, M.: "Early growth response gene-1 (Egr-1) regulates the expression of the rat luteinizing hormone receptor gene"Biol. Reprod.. 66. 1813-1819 (2002)
• [Publications] Inoue, K.: "The effect of transforming growth factor-beta on the expression of luteinizing hormone receptor in cultured rat granulosa cells"Biol. Reprod.. 67. 610-615 (2002)
• [Publications] Hirano, S.: "Rat zinc-fingers and homeoboxes 1 (ZHX1), a nuclear factor-YA-interacting nuclear protein, forms a homodimer"Gene. 290. 107-114 (2002)
• [Publications] Yamada, K.: "Functional analysis and the molecular dissection of zinc-fingers and homeoboxes 1 (ZHX 1)"Biocehm. Biophys. Res. Commun.. 279. 3368-374 (2002)
• [Publications] Sekiguchi, T.: "Transcriptional regulation of Epiregulin gene in the rat ovary"Endocrinol.. 143. 4718-4729 (2002)