2003 Fiscal Year Annual Research Report
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14750642
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| Research Institution | Seikei University |
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Principal Investigator |
青柳 里果 成蹊大学, 工学部, 助手 (20339683)
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| Keywords | 免疫測定法 / 蛍光発光 / 非分離免疫測定法 / タンパク質 / 抗原抗体反応 / プロテインA / 免疫グロブリンG / FITC |
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| Research Abstract |
その場測定を可能とするために、非分離免疫測定法の固定化蛍光標識試薬を用いた系(不均一系)で実用化を目指している。モデル試料として免疫グロブリンG(IgG)を選び、ガラスへ固定化したFITC標識プロテインAを用いて、蛍光増強法でIgGを定量した。本研究では、固定化基板をガラスとした系において、試料中のIgG濃度と蛍光発光強度との関係を検討し、共存物質の影響も調べた。さらに応答時間の短縮化を目指して、非定常状態の測定を試みた。IgG濃度10〜50μg/mlの範囲では、約40分間で、全濃度において蛍光強度は定常に達するが、より迅速な応答を目指し、蛍光増強の経時変化率(初速度)を用いたIgG定量を試みた。IgGのみを含む溶液をこのシステムで測定した場合は、IgG濃度に応答してFITC標識プロテインA固相化試薬の蛍光強度は増強した。一方、プロテインAと結合性のないHSA溶液と反応させ、同様に蛍光強度と濃度の関係を調べた結果では、HSA濃度が変化しても蛍光強度はほとんど変化しなかったので、プロテインAと結合したIgGへの蛍光応答特異性が確認できた。さらに、各濃度のIgG溶液を測定した結果から、IgG濃度が大きいほど、蛍光増強も速く、大きくなることが示された。そこで、初めの5分間の蛍光強度の経時変化から、蛍光強度経時変化の初速度を求め、IgG濃度との相関を検討した結果、IgG濃度10〜50μg/mlの範囲で有効な相関が得られた。したがって、蛍光増強法を利用した測定で、非定常測定によって、数分以内の迅速測定が可能であることが示された。
さらに、センサの表面状態を飛行時間型二次イオン質量分析法で評価した。
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[Publications] 青柳里果, 大岩佑子, 工藤正博: "タンパク質のin situ測定に適した蛍光免疫センサの開発"Chemical Sensors. 18 Supplement B. 61-63 (2002)
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[Publications] S.Aoyagi, R.Imai, K.Sakai, M.Kudo: "Reagentless and regenerable immunosensor for monitoring of immunoglobulin G based on non-separation immunoassay"Biosensors and Bioelectronics. 18. 791-795 (2003)
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[Publications] 青柳里果, 工藤正博: "TOF-SIMSによる金属、ガラス、高分子上のタンパク質測定"日本学術振興会 マイクロビームアナリシス第141委員会. 第112回研究会資料. No.1319 (2003)
