カルシウムチャネルの機能修飾と細胞膜への動員機構との関連

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14770015
• Research Institution: Sapporo Medical University
• Principal Investigator: 長島 雅人 札幌医科大学, 医学部, 講師 (20264525)
• Keywords: イオンチャネル / 心筋 / カルシウム電流

Research Abstract

本年度はYeast Two Hybrid法によるL型カルシウムチャネルのα1cサブユニットに結合する新たな分子の探索を行った。まずL型カルシウムチャネルのα1cサブユニットの細胞質側に相当するI-II linker、II-III linker、C末部位より適当な扉列を選び、Baitを設定してbindingドメインを含むvectorを作成し、Yeastにトランスフォーメーションした。それらを用いて、activationドメインを含むvectorに挿入されたヒト心筋ライブラリーをスクリーニングした。そのうちII-III linkerの一部をBaitとしたvectorを用いた最も酵母の生育条件の厳しいスクリーニング法(high stringency)において、13個の陽性colonyを検出した。特にYeastの生育が著明な2個のcolonyをピックアップしてライブラリー由来のプラスミドDNAを回収し、シークエンスを解析したところ一つはJun activation domain binding protein (JAB)であり、もう一つはdehydrogenaseであった。現在はJABに焦点をあてて研究を進めている。RT-PCR法によるとJABは心筋にはかなり多く発現しているが、心筋以外の組織にも比較的発現が多く、比較的ubiquitousな分子と考えられた。L型カルシウムチャネルのα1cサブユニットの機能に対する影響を観察するために、現在JAB遺伝子を発現ベクターに入れて、過剰発現させる系と、内因性のJABをsiRMAを用いてノックダウンさせる系の二つの実験系を用いて、カルシウム電流への作用の解析を行っているところである。

Research Products

• [Publications] Yoichi Yamada: "A truncated splice variant of KCNQ1 cloned from rat heart"Biochem Biophys Res Comm. 294. 199-204 (2002)
• [Publications] Seki Sumihiko: "Fetal and postnatal development of Ca transients and Ca spark in rat cardiomyocytes"Cardiovasc Res. (in press). (2003)