海綿由来の細胞毒性物質onnamide Aの作用機序に関する研究

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14780468
• Research Institution: The Institute of Physical and Chemical Research
• Principal Investigator: 濱田 季之 理化学研究所, タンパク質機能研究チーム, リサーチアソシエイト (40321799)
• Keywords: 細胞毒性 / 活性発現メカニズム / 標的タンパク質 / アフィニティーカラ / MALDI-TOF MS / 一次構造データベース / HeLa細胞 / リボソーム

Research Abstract

海綿Theonella swinhoei由来の強力な細胞毒性化合物onnamides類の活性発現メカニズムを解明するために、その標的タンパク質(onnamide Aと相互作用するタンパク質)の探索ならびに同定を行った。
Onnamide Aの直鎖部分のカルボン酸にaminoalkyl agarose gel (Affi-Gel 102,Bio-Rad)を結合させたアフィニティー担体を作成し、探索源としてウシの脳の水抽出物を用い、バッチ法での標的タンパク質の抽出を試みた。その結果、CBB染色でSDS-PAGE上に標的タンパク質由来と思われる十数個のバンドを検出した。それぞれのバンドを切り出し、トリプシン消化後、MALDI-TOF MSで分析した。得られたピークから、ProfoundやMS-Fitなどの一次構造データベース検索(ペプチドマスフィンガープリント法)を行い、8個の標的タンパク質を推定した。これらについては、現在、BIACORE等を用いて、相互作用情報の解析を行っている。
今後、探索源をHeLa細胞(ヒト由来のガン細胞)として、標的タンパク質の探索を進めていく予定であり、HeLa細胞の培養やアフィニティーカラムの準備もおこなっている。また、最近の調査から、onnamide Aはリボソームに結合することが示唆されていることから、新たな探索源(細胞のリボソーム画分)や、photoaffinity法による標的タンパク質の検出も検討している。