2002 Fiscal Year Annual Research Report
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14780561
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
山本 卓 広島大学, 大学院・理学研究科, 講師 (90244102)
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| Keywords | ウニ / 分泌性因子 / 誘導 |
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| Research Abstract |
16細胞期のバフンウニ胚の細胞を解離して、小割球と中・大割球をエルトリエーターにより分別回収した。それぞれの解離細胞を64細胞から128細胞になる時間まで培養した。培養した細胞から直接mRNAを調整する予定であったが、細胞数が少なかったため、total RNAを調整して、これを鋳型としてcDNAの合成をおこなった。cDNAのサイズが300bpから500bpになるようにプライマーを過剰に入れてcDNAを合成し、adaptor-primerを結合し、PCRによる増幅を行った。小割球と中・大割球の増幅したcDNAを用いて、PCRサブトラクションにより小割球特異的なcDNAの集団を得た。
小割球特異的なcDNAを酵母のシグナルトラップベクターに挿入したcDNAライブラリーを作製した。このcDNAライブラリーを内在性のインベルターゼを欠損した酵母株に形質転換し、スクロース存在下で培養を行った。挿入したcDNAに分泌性シグナルが含まれたものが、生育可能となりコロニーを形成した。現在、形成されたコロニーを選別し、組みこまれたcDNA配列を解析中である。当初の計画より実験は遅れてはいるが、システムは順調に動いていると考えられる。
また、シグナルトラップ法でクローニングされた配列は、たんぱく質のN末端のみである。そこで、全長のcDNAをクローニングするためのcDNAライブラリーを64細胞期、間充織胞胚期のmRNAから構築中である。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Fuchikami, T., et al.: "T-brain homolog (HpTb) is involved in the archenteron induction signals of micromere descendant cells in the sea urchin embryo"Development. 129. 5205-5216 (2002)
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[Publications] Fujimoto, K., Yamamoto, T., Kitano, T., Abe, S.-I.: "Promotion of cathepsin L activity in newt spermatogonial apopotosis induced by prolactin"FEBS Lett. 521・1-3. 43-46 (2002)
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[Publications] Yazawa, T., Yamamoto, T., Jin Yan., Abe, S.-I.: "Follicle-stimulating hormone is indispensable for the last spermatogonial mitosis preceding meiosis initiation in newts (Cynops pyrrhogaster)"Biol Reprod. 66・1. 14-20 (2002)
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[Publications] Kurita, M., Kondoh, H., et al.: "Utilization of a particle gun DNA introduction system for the analysis of cis-regulatory elements controlling the spatial expression pattern of HpArs in sea urchin embryos"Dev Genes and Evol. 213・1. 44-49 (2003)
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[Publications] Yamamoto, T., Yazawa, T., Fujimoto, K., Kitano, T., Abe, S.-I.: "Low temperature promotes annexin V expression in newt testis"Zool Sci. (in press). (2003)
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[Publications] Yazawa, T., Nakayama, Y., Fujimoto, K., Matsuda, Y., Yamamoto, T.: "Abnormal Spermatogenesis at Low Temperatures in the Japanese Red-bellied Newt, Cynops pyrrhogaster : Possible Biological Significance of the Cessation of Spermatocytogenesis"Mol Reprod Dev. (in press). (2003)
