Nurr1相互作用分子から迫るカテコールアミン合成酵素発現機構の解明

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14780586
• Research Institution: Fujita Health University
• Principal Investigator: 鈴木 崇弘 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助手 (70298545)
• Keywords: Nurr1 / Tyrosine Hydroxylase / ATF-2

Research Abstract

本研究課題においては、チロシン水酸化酵素(TH)発現誘導に対してNurr1と協調的に機能する分子を評価する細胞系の構築が重要となる。申請者が平成12〜13年度に受けた前科研費研究課題(奨励研究(A)12780591)における成果として、Nurr1の誘導にcAMP応答配列(CRE)の転写活性が重要であることを示し、さらに神経発達に関わる分子であるV-1/Myotrophinを過剰発現させたPC12D細胞(V-1細胞)においてCRE転写活性およびATF-2のリン酸化依存的な活性化を示した。ATF-2はNurr1プロモーター領域に存在するCREに結合する因子であり、またアポトーシスと細胞分化の二面的な制御を行う因子であることから、Nurr1の機能との密接な繋がりが予想される。そこで、CRE転写活性およびATF-2によるTH発現誘導機構に関する解析を優先的に行った。
最初に、TH活性・タンパク量の調節に関わるGTPシクロヒドロラーゼI(GCH)に関して、V-1細胞におけるCRE依存的なGCH遺伝子転写の上昇を示し、論文発表を行った。次に、ATF-2のドミナントネガティブ体の過剰発現がV-1細胞におけるCRE依存的なTH遺伝子転写の上昇を抑制することを示し、前課題の成果と合わせて論文発表を行った。現在、細胞レベルでのNurr1およびATF-2によるTH発現誘導系の探索および構築を行っており、両者の機能的連関について解析中である。また、COS-1細胞におけるFLAG-Nurr1の発現系においては、免疫沈降実験系の条件検討を進めた。その結果、FLAG-Nurr1に対する免疫沈降物中において特異的に検出されるタンパク質を、Nurr1より高分子側に3つ、低分子側に4つ銀染色レベルで観察している。現在、このタンパク質の同定を進めている。

Research Products

• [Publications] Suzuki T, et al.: "Enhanced expression of GTP cyclohydrolase I in V-1-overexpressing PC12D cells"Biochem Biophys Res Commun. 293(3). 962-968 (2002)
• [Publications] Suzuki T, et al.: "Identification of ATF-2 as a transcriptional regulator for the tyrosine hydroxylase gene"J Biol Chem. 277(43). 40768-40774 (2002)
• [Publications] Ikemoto, K.: "Localization of sepiapterin reductase in the human brain"Brain Res. 954(2). 237-246 (2002)
• [Publications] Yamakuni, T.: "V-1, a catecholamine biosynthesis regulatory protein, enhances GTP cyclohydrolase I gene transcription in a cAMP-responsive element dependent manner"Nippon Yakurigaku Zasshi. 120(1). 82-84 (2002)