2002 Fiscal Year Annual Research Report
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14780633
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
城倉 浩平 信州大学, 医学部, 講師 (30303473)
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| Keywords | マウス胚性幹細胞 / 胚様体 / 腎臓 / 原基細胞 / 尿管芽 / 造後腎中胚葉 / ネフロン / 再生 |
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| Research Abstract |
本年度は、in vitroおよびin vivoの両系においてマウスES細胞由来腎臓原基細胞の探索を試みた。in vitroでは主に遺伝子発現の検出を、in vivoでは主に組織化学的検出を行った。
(1) マウス胚様体派生コロニーにおける腎臓発生必須遺伝子の検出。
ハンギングドロップ法でマウスES細胞から胚様体を作成し、これを再接着させて多様な分化細胞のコロニーを得た。接着後0、3、6、9、12、15、18、21日目のコロニーからRNAを抽出し、RT-PCR法により腎臓発生に必須な遺伝子群、Pax2、lim1、WT1、Sall1、Eya1の検出を行った。その結果、胚様体接着後6日の時点でPax2、lim1、WT1、Sall1、Eya1の全ての遺伝子発現が確認され、これらは21日目まで持続的に検出された。いずれの遺伝子も腎臓特異的ではなく他の器官にも発現することから、腎臓原基細胞の存在を直接的に証明するものではないが、ES細胞由来細胞群の中に、腎臓原基細胞が存在する可能性が示唆された。
(2) マウスES細胞由来奇形種における腎臓原基細胞の検出。
マウスES細胞あるいは胚様体由来細胞をBALB/cヌードマウスの後腹膜下に移植し、形成された奇形腫を14日後に摘出し、組織化学的手法による腎臓原基構造の探索を行った。使用した抗Pax2抗体、抗TROMA-1抗体、DBAレクチンは、尿管芽やそのもととなる中腎管、造後腎中胚葉等を検出できる。その結果、奇形腫内にTROMA-1およびDBAレクチン染色陽性の嚢胞様・管腔様構造が多数形成されていた。これらの多くは消化管に関連した構造であると考えられる。Pax2陽性細胞は主に神経様構造に存在し、散在するPax2陽性細胞も検出された。しかし、Pax2陽性の管腔様構造は現時点では未発見であり、引き続き中腎管あるいは後腎原基構造の検出を継続中である。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Johkura K: "Survival and function of mouse embryonic stem cell-derived cardiomyocytes in ectopic transplants"Cardiovascular Research. (in press). (2003)
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[Publications] Cui L: "Biodefense function of omental milky spots through cell adhesion molecules and leukocyte proliferation"Cell and Tissue Research. 310. 321-330 (2002)
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[Publications] Iinuma H: "Intracellular targeting therapy of cisplatin-encapsulated transferring-polyethylene glycol liposome on peritoneal dissemination of gastric cancer"International Journal of Cancer. 99. 130-137 (2002)
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[Publications] Okamura S: "Formation of the biopulsatile vascular pump by cardiomyocyte transplants circumvallating the abdominal aorta"Tissue Engineering. 8. 201-211 (2002)
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[Publications] Johkura K: "Nephrogenesis accompanied by vascularization in the mouse embryonic metanephros transplanted into the adult kidney for creation of additional nephrons"Nephrology. 7. 92-100 (2002)
