ゼブラフィッシュの肝毒性に対するAstragalusポリ多糖の防御効果の検討

2014 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14F03777
• Research Institution: Rakuno Gakuen University
• Principal Investigator: 寺岡 宏樹 酪農学園大学, 獣医学群, 教授 (50222146)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): YIN Guojun 酪農学園大学, 獣医学群, 外国人特別研究員
• Project Period (FY): 2014-04-25 – 2016-03-31
• Keywords: 魚毒性 / 肝毒性 / ゼブラフィッシュ / 漢方薬

Outline of Annual Research Achievements

A　ゼブラフィッシュ稚魚における肝毒性の検出：四塩化炭素の肝毒性を検討した。アポトーシスおよびネクローシスを検出するアクリジンオレンジ染色、脂肪肝を検出するオイルレッド染色とも安定した効果を確認できなかった。しかし、デキサメサゾンとエタノールによる肝肥大（120hpf）を倒立顕微鏡観察を用いた左側像から確認し、断面積の有意な増加を検出できた。四塩化炭素、テトラサイクリン、カルバマゼピン、ネオマイシン、TCPOBOP、エストラジオール、2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin：TCDDなど肝毒性が哺乳動物で報告されている物質では影響を確認できなかった。

B　肝肥大に対するAPSの影響：デキサメサゾンおよびエタノールによる肝肥大に対して、APSの水性暴露は全く影響を与えなかった。また、TCDD誘発性浮腫に対してもAPSは無効であった。大量の結晶が析出しているので充分量が吸収されていない可能性がある。

C　遺伝子発現に対する効果：デキサメサゾンは免疫および代謝に関与する一群の遺伝子発現に影響することが哺乳動物で知られているので、TNF, iNOS, IL1, IL-10, IL-12, VPS, FKBP5,FOIE-GRAS, HER6, CD36, ANGPTL4について肝臓原基が認められる受精後120hrのゼブラフィッシュにおける定量PCR法を検討した。これまでのところ、ANGPTL4が増加率はわずかではあるが、有意に誘導されることを見いだしている。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

肝毒性の検出法として発達期ゼブラフィッシュで報告されている方法がいずれも検出感度が低いことがわかったが、明視野顕微鏡下で肝肥大を検出するという単純な方法に到達するまで期間を比較的長期間を要した。また、当初検討を予定していたAPSはコイの培養肝臓スライスでは四塩化炭素誘発性肝毒性を抑制するが、ゼブラフィッシュ用の栄養液では多くの析出結晶が確認されるなど、きわめて溶解性が低いことが問題と考えられる。

Strategy for Future Research Activity

A　昨年度の成果として、デキサメサゾンによる肝肥大が確認できた。このことは、中国の養殖魚で問題となっている肝肥大にストレスが関与している可能性を示唆している。そこで、デキサメサゾン誘発性肝肥大の作用経路を明らかにするため、グルココルチコイド受容体（GR）やGRやプレグナンXレセプター（PXR）に対する拮抗薬やノックダウンの効果を観察する。また、肝肥大を抑制するための薬物を探索する。

B　ゼブラフィッシュ成魚を用いたAPSの肝毒性防御作用の検討：
APSは水に溶けにくいが、APSを含む餌を成魚に食べさせることにより、四塩化炭素誘発性肝障害に対する影響を観察する。肝毒性は摘出した肝臓のホールマウントTUNEL染色を指標にする。組織学的観察と肝毒性指標としての肝臓酵素、抗酸化酵素活性についても測定する。さらに、抗酸化酵素の他、APSの薬理作用との関連が哺乳動物で示唆されている免疫および代謝関連遺伝子発現についても検討する。

Research Products

• [Journal Article] Identification and functional characterization of novel feline cytochrome P450 2A (2015)
  • Author(s): Okamatsu G, Komatsu T, Kubota A, Onaga T, Uchide T, Endo D, Kirisawa R, Yin G, Inoue H, Kitazawa T, Uno Y, Teraoka H.
  • Journal Title: Xenobiotica Volume: in press Pages: in press
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Hepatoprotective and antioxidant effects of dietary Angelica sinensis extract against carbon tetrachloride-induced hepatic injury in Jian Carp (Cyprinus carpio var. Jian) (2015)
  • Author(s): Cao L, Du J, Ding W, Jia R, Liu Y, Xu P, Teraoka H & Yin G.
  • Journal Title: Aquaculture Research Volume: in press Pages: in press
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Hepatoprotective and antioxidant effects of Angelica Sinensis extract against carbon tetrachloride-induced hepatic injury in fish (2015)
  • Author(s): Yin G, Cao L, Du J, Teraoka H.
  • Organizer: 第42回 日本毒性学会学術年会
  • Place of Presentation: 石川県立音楽堂、金沢市、石川県
  • Year and Date: 2015-06-29 – 2015-07-01
• [Presentation] Prostacyclin inhibits precardiac edema in develping zebrafish exposed to 2,3,7,8-tetrachlrodibenzo-p-dioxin (2015)
  • Author(s): Teraoka H, Nijoukubo D, Yin G, Kitazawa T.
  • Organizer: 54th Annual Meeting of Society of Toxicology
  • Place of Presentation: San Diego Convention Center, San Diego, CA, USA
  • Year and Date: 2015-03-22 – 2015-03-26
• [Presentation] 発達期ゼブラフィッシュのにおけるダイオキシン誘発性心臓周囲浮腫におけるトロンボキサンとプロスタサイクリン経路の役割 (2014)
  • Author(s): 二条久保大祐、奥野悠樹、山越あゆ美、Yin Guojun、北澤多喜雄、寺岡宏樹
  • Organizer: 第157回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 北海道大学札幌高等教育推進機構
  • Year and Date: 2014-09-09 – 2014-09-12
• [Presentation] 発達期ゼブラフィッシュのダイオキシン誘発性浮腫におけるトロンボキサンとプロスタサイクリンの相反作用 (2014)
  • Author(s): 二条久保大祐、奥野悠樹、山越あゆ美、Yin Guojun、北澤多喜雄、寺岡宏樹
  • Organizer: 第41回 日本毒性学会学術年会
  • Place of Presentation: 神戸国際会議場
  • Year and Date: 2014-07-02 – 2014-07-04