2016 Fiscal Year Annual Research Report
ｉＰＳ細胞由来の造血幹細胞を利用した再生不良性貧血自己抗原の同定
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14F04419
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
中尾 眞二 金沢大学, 医学系, 教授 (70217660)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
ESPINOZA CALDERO JORGE 金沢大学, 医学系, 外国人特別研究員
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| Project Period (FY) |
2014-04-25 – 2017-03-31
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| Keywords | 再生不良性貧血 / 細胞傷害性T細胞 / iPS細胞 / CD34陽性細胞 / 6pLOH陽性細胞 / T細胞レセプター / HLA-Bアレル |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成27年度までの研究により、シクロスポリン（CsA）依存性の1例（KANA1）と、CsAで改善した1例（KANA6）から、6pLOH(+)、6pLOH(-)（野生型）、HLA-Bアレル（B4002またはB5401）単独欠失の3種類のiPS細胞クローンを樹立することに成功した。これらのiPS細胞を種々の造血因子の存在下で3週間培養することにより、約70%のCD34陽性細胞を含む造血前駆細胞集団が誘導された。KANA1由来の野生型CD34 陽性細胞で患者自身のCD8陽性T細胞を刺激することにより、野生型CD34陽性細胞のみを選択的に傷害する細胞傷害性T細胞（CTL）株が誘導された。このCTL株からCTLクローンの樹立を試みたが、増殖が不良で、維持することが困難であったため、CTL株のT細胞レセプター（TCR）レパトアを解析し、頻度の高いTCRβ鎖陽性T細胞からTCRα鎖β鎖のcDNAを作製した。このうち1種類のTCRモチーフは、初発時に保存されていた骨髄T細胞でもっとも頻度の高いCD8陽性PD-1陽性T細胞中のTCRモチーフと一致していた。このｃDNAを用いてJurkat細胞のトランスフェクタントを作製し、野生型CD34陽性細胞に対する特異性を現在検討している。
一方、KANA6については、未輸血・無治療状態の骨髄が保存されていたため、PD-1陽性CD137陽性T細胞分画から単一細胞ソーティングを行い、頻度の高い4種類のTCRモチーフcDNAを用いて、KANA1と同様にJurkat細胞にトランスフェクトした。作製された4種類のトランスフェクタントは、野生型CD34陽性細胞には反応したが、B5401欠失CD34陽性細胞には反応しなかった。このため、現在CD34陽性細胞からcDNAライブラリーを作製し、HLA-B*54:01をトランスフェクトしたCOS細胞への導入を準備している。
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| Research Progress Status |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
28年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(7 results)
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[Journal Article] The simultaneous inhibition of the mTOR and MAPK pathways with Gnetin-C induces apoptosis in acute myeloid leukemia.2017
Author(s)
Espinoza JL, Elbadry MI, Taniwaki M, Harada K, Trung LQ, Nakagawa N, Takami A, Ishiyama K, Yamauchi T, Takenaka K, Nakao S
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Journal Title
Cancer Lett
Volume: 400
Pages: 127-136
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] A functional polymorphism in the NKG2D gene modulates NK-cell cytotoxicity and is associated with susceptibility to Human Papilloma Virus-related cancers.2016
Author(s)
Espinoza JL, Nguyen VH, Ichimura H, Pham TT, Nguyen CH, Pham TV, Elbadry MI, Yoshioka K, Tanaka J, Trung LQ, Takami A, Nakao S
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Journal Title
Sci Rep
Volume: 6
Pages: 39231
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Cyclosporine restores hematopoietic function by compensating for decreased Tregs in patients with pure red cell aplasia and acquired aplastic anemia.2016
Author(s)
Dao AT, Yamazaki H, Takamatsu H, Sugimori C, Katagiri T, Maruyama H, Zaimoku Y, Maruyama K, Ly TQ, Espinoza L, Nakao S
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Journal Title
Ann Hematol
Volume: 95
Pages: 771-781
DOI
Peer Reviewed
