発育環遮断による新規予防法開発を目指したトリパノソーマ細胞分化機構の解明

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 14J01442
• Research Institution: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• Principal Investigator: 菅沼 啓輔 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 特別研究員(PD)
• Project Period (FY): 2014-04-25 – 2016-03-31
• Keywords: トリパノソーマ / RNA結合タンパク質 / 転写後遺伝子発現調節機構

Outline of Annual Research Achievements

T. congolense EMFステージ特異的発現RNA結合タンパク質 （TcRBP6）のRNA結合能をRNAゲルシフト法によって解析した。まず前年度作製した遺伝子組換えTcRBP6 (rTcRBP6)と、人工合成したビオチン標識付きRNA（poly-A, G, C, ならびにU）をin vitroで混合し、標識RNA-rTcRBP6複合体形成反応後、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で展開、標識RNA-rTcRBP6複合体によるゲルシフト像を解析した。その結果、rTcRBP6はpoly-Cとのみ特異的に結合した。そのため、rTcRBP6はmRNA中のシトシンに富んだ領域に結合している可能性が示唆された。ついでTcRBP6の結合するmRNA群を特定するために、前年度作製した抗TcRBP6抗体を用いたRNA免疫沈降法により、mRNA-TcRBP6複合体を精製した。その結果、抗TcRBP6抗体を用いた免疫沈降で精製されたRNA量は、ネガティブコントロール（正常マウス抗体）を用いた免疫沈降で精製されたRNA量と比較して有意に多かった。また、免疫沈降により得られたmRNAを次世代シーケンサーで網羅的に解析した結果、EMFステージ特異的に発現する遺伝子群や遺伝子発現調節機能を持つと考えられるRNA結合タンパク質が複数同定された。以上より、TcRBP6はT. congolense EMFで発現する特定の遺伝子RNAに結合し、その発現時期を制御していると考えられる。

Research Progress Status

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

27年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] Novel methods for the molecular discrimination of Fasciola spp. on the basis of nuclear protein-coding genes (2016)
  • Author(s): Takuya Shoriki, Madoka Ichikawa-Seki, Keisuke Suganuma, Ikunori Naito, Kei Hayashi, Minoru Nakaoe, Junya Aita, Uday Kumar Mohanta, Noboru Inoue, Kenji Murakami, Tadashi Itagaki
  • Journal Title: Parasitology International Volume: 65 Pages: 180-183
  • DOI: 10.1016/j.parint.2015.12.002
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] アフリカトリパノソーマ症対策の現在、そして未来 (2015)
  • Author(s): 菅沼啓輔、井上昇
  • Journal Title: 生体の科学 Volume: 66 Pages: 339-342
  • DOI: http://dx.doi.org/10.11477/mf.2425200186
• [Journal Article] Molecular characterization of Cryptosporidium parvum from two different Japanese prefectures, Okinawa and Hokkaido (2015)
  • Author(s): Madoka Ichikawa-Seki, Junya Aita, Tatsunori Masatani, Moemi Suzuki, Yoshiki Nitta, Genta Tamayose, Takehiro Iso, Keisuke Suganuma, Takashi Fujiwara, Keita Matsuyama, Tadamasa Niikura, Naoaki Yokoyama, Hiroshi Suzuki, Kazuhiro Yamakawa, Hisashi Inokuma, Tadashi Itagaki, Satoshi Zakimi and Yoshifumi Nishikawa
  • Journal Title: Parasitology International Volume: 64 Pages: 161-165
  • DOI: 10.1016/j.parint.2014.11.007
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Development of monocle antibodies against Plasmodium falciparum thioredoxin peroxidese 1 and its possible application for malaria diagnosis, (2015)
  • Author(s): Hassan Hakimi, Yasuyuki Goto, Keisuke Suganuma, Jose Ma M. Angeles, Satoru Kawai, Noboru Inoue and Shin-ichiro Kawazu
  • Journal Title: Experimental Parasitology Volume: 154 Pages: 62-66
  • DOI: 10.1016/j.exppara.2015.04.018
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Trypanosoma congolense EMFステージ特異的RNA結合タンパク質TcRBP6の機能解析 (2015)
  • Author(s): 菅沼啓輔, Marcin Jalalski, 山岸潤也, 山崎詩乃, 河津信一郎, 井上 昇
  • Organizer: 第61回日本寄生虫学会・日本衛生動物学会北日本支部合同大会
  • Place of Presentation: 帯広畜産大学（北海道・帯広市）
  • Year and Date: 2015-10-10
• [Presentation] The analysis of stage differentiation mechanisms of T. congolense by RNA-binding protein-RNA interaction (2015)
  • Author(s): Keisuke Suganuma, Marcin Jakalski, Jyunya Yamagishi, Shino Yamasaki, Shin-ichiro Kawazu, Noboru Inoue
  • Organizer: 第25回国際獣医寄生虫学会
  • Place of Presentation: リバプール（UK）
  • Year and Date: 2015-08-16 – 2015-08-20
  • Int'l Joint Research
• [Remarks] 帯広畜産大学 原虫病研究センター ホームページ
  • URL: http://www.obihiro.ac.jp/~protozoa/index.html