2015 Fiscal Year Annual Research Report
網羅的スクリーニングによる、動原体の安定性を保証する分子機能ネットワークの解明
| Project/Area Number |
14J05063
|
|---|
| Research Institution | Osaka University |
|---|
Principal Investigator |
川上 慶 大阪大学, 生命機能研究科, 特別研究員(PD)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2014-04-25 – 2017-03-31
|
| Keywords | 動原体 / セントロメア / 分裂酵母 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、真核生物の染色体において、動原体の確立を決定づける因子（動原体確立因子）の同定を目的とする。さらに、その動原体確立因子の上流、下流で機能する因子を含め、これらの因子間相互作用を細胞周期特異性に注目して解析する。平成27年度は、平成26年度中に作成した、一番染色体の腕部にLacOリピート配列を挿入した分裂酵母株とGFP-LacIタンパク質を酵母細胞内で発現させることが可能なplasmidを用いて以下の実験を行った。GFP-LacIにいくつかの動原体タンパク質を融合させたplasmidを作成し、動原体タンパク質をLacOリピートに強制的に結合させ、それと同時に内在性のセントロメアを破壊した。その結果、GFP-LacIに融合した動原体タンパク質依存的に、セントロメア破壊後のサバイバーの頻度が上昇するものが得られた。これらサバイバーの染色体を解析した結果、新しいセントロメアがLacOリピート周辺に形成されていることが明らかとなった。このことから、セントロメアの新規確立を決定づける確立因子を同定することができたと考えられる。また、この動原体タンパク質をLacOリピート上に結合させた際に、幾つかの動原体タンパク質がLacOリピート上にリクルートされていることが蛍光顕微鏡観察により明らかになった。このことから、確立因子の下流に存在する因子に関しても27年度に同定することができたと考えている。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
目的としていた動原体確立因子を同定することができ、さらにその下流で働く因子に関しても幾つか同定できたため。
|
| Strategy for Future Research Activity |
同定した動原体確立因子が細胞周期のどのタイミングでどのような因子をリクルートするのか、蛍光顕微鏡観察とクロマチン免疫沈降法を用いて解析する。得られた研究成果について、論文にまとめて公表する。
|
Research Products
(2 results)
