2005 Fiscal Year Annual Research Report
真核生物染色体DNA複製フォークの分子ダイナミズム
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15107003
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
杉野 明雄 大阪大学, 大学院・生命機能研究科, 教授 (90231737)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
川崎 泰生 大阪大学, 大学院・生命機能研究科, 助手 (30243257)
岡部 勝 大阪大学, 遺伝情報実験センター, 教授 (30089875)
関 丘 名古屋大学, 大学院・理学研究科, 講師 (40271118)
奥野 友紀子 大阪大学, 大学院・生命機能研究科, 助手 (00372524)
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| Keywords | 染色体複製 / DNAポリメラーゼ / アフリカツメガエル / 出芽酵母 / ほ乳動物細胞 |
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| Research Abstract |
1)出芽酵母細胞粗抽出液を使ってpre-RC複合体の形成反応(複製開始部位への逐次的なORC→Cdc6p→Cdt1p→Mcm2-7p蛋白質のLoading反応)を詳細に解析した。また、各々高度に精製した蛋白複合体を使って試験管内でpre-RC形成反応の再構成実験に成功した(論文投稿中)。
2)出芽酵母染色体DNA複成に必須なGINS(Sld5p-Psf1p-Psf2p-Psf3p複合体)を精製し、この複合体がPolεホロ酵素複合体と1:1の複合体を形成することを明らかにした。一方、GINSはPolεホロ酵素のDNA合成反応を特異的に著しく促進し、GINSがPolεのクランプとして働いていることを明らかにした(論文投稿中)。
3)アフリカツメガエル卵粗抽出液の染色体DNA複製反応に必要なPolε、GINS,Cdc45p,Cut5p等の蛋白複合体を精製し、Polε-GINS,Polε-Cdc45p,GINS-Cut5-Cdc45p複合体形成反応を試験管内で再構成した。更に出芽酵母と同様、アフリカツメガエルGINSがアフリカツメガエルPolε複合体のDNA合成反応を著しく促進することを明らかにした。
4)前年度に同定したマウス5番染色体に存在する複数の複製開始部位のより詳細な解析をDNAマイクロアレイを使用して行なった。
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