C型肝炎に対する樹状細胞の機能制御による細胞免疫療法の開発

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15109006
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 林 紀夫 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (00144478)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中西 文彦 大阪大学, 医学部附属病院, 医員(臨床研究) ; 平松 直樹 大阪大学, 医学系研究科, 寄附講座教員 (30362700) ; 竹原 徹郎 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (70335355)
• Keywords: 樹状細胞 / C型肝炎 / NK細胞 / MICA / B / サブセット / Pseudo-HCV / IFNα / IL-15

Research Abstract

本年度は研究実施計画に基づき以下の3点について焦点をあて研究を行った。
1.C型慢性肝炎患者における樹状細胞(DC)サブセットの数的・機能的解析
末梢血単核球の中でlineageマーカー(CD3,CD14,CD16,CD19,CD20,CD56)が陰性でHLA-DR陽性の細胞をDCとし、さらにCD11cとCD123の染色性でミエロイドDC(lineage(-),HLA-DR(+),CD11c(+),CD123(+))と形質細胞様DC(lineage(-),HLA-DR(+),CD11c(-),CD123(++))を同定した。ミエロイドDC、形質細胞様DCのいずれもC型慢性肝炎患者群では非感染者群より低下していた。
2.Pseudo-HCVを用いた感染系の構築
HCVのE1E2蛋白を介した細胞へのウイルス侵入を評価できるpseudo-HCVの実験系を用いて、健常者由来の様々なDCに対する感染効率を評価した。検討したDCのなかでGM-CSFで誘導したDay 4の単球由来DCがPseudo-HCVに対して最も高い感受性を示した。
3.DCサブセットによるNK細胞活性化機構の解析
末梢血単球分画よりGM-CSFとIL-4を用いて未成熟DCを誘導し、IFNαあるいはIL-15で24時間刺激を加えた。刺激後のDCは刺激前に比し、NK細胞活性化能が増強しており、これは刺激によるMICA/Bの発現誘導によるものであった。C型慢性肝炎患者のDCはIL-15に対する反応性は保たれていたが、IFNαに対しては反応性が欠如していた。
以上の結果より、C型慢性肝炎患者ではblood DCのレベルで数的、機能的異常がみられ、またMICA/Bという特異な分子の発現が低下することによりNK細胞活性化能が低下することが明らかとなった。また、DCはある特定の成熟段階においてHCV感染に対して感受性となり、このことがDCの数的、機能的異常に関与する可能性が示唆された。

Research Products

• [Publications] Miyagi T, Takehara T, et al.: "CD1d-mediated stimulation of natural killer T cells selectively activates hepatic natural killer cells to eliminate experimentally disseminated hepatoma cells in murine liver"International Journal of Cancer. 106(1). 81-89 (2003)
• [Publications] Jinushi M, Takehara T, et al.: "Expression and role of MICA and MICB in human hepatocellular carcinomas and their regulation by retinoic acid"International Journal of Cancer. 104(3). 354-361 (2003)
• [Publications] Jinushi M, Takehara T, et al.: "Critical role of MHC class I-related chain A and B expression on interferon α-stimulated dendritic cells in NK cell activation : Impairment in chronic hepatitis C virus infection"Journal of Immunology. 170(3). 1249-1256 (2003)
• [Publications] Jinushi M, Takehara T, et al.: "Autocrine/paracrine IL-15 that is required for type I IFN-mediated dendritic cell expression of MHC class I-related chain A and B is impaired in hepatitis C virus infection"Journal of Immunology. 171(10). 5423-5429 (2003)
• [Publications] Hosui A, Ohkawa K, et al.: "Hepatitis C virus core protein differentially regulates the JAK-STAT signaling pathway under interleukin-6 and interferon-γ stimuli"Journal of Biological Chemistry. 278(31). 28562-28571 (2003)
• [Publications] Suzuki T, Takehara T, et al.: "Intravenous injection of naked plasmid DNA encoding hepatitis B virus (HBV) produces HBV and induces humoral immune response in mice"Biochem Biophys Res Commun. 300(3). 784-788 (2003)