2004 Fiscal Year Annual Research Report
フザリウム病原菌の2種の転写制御因子によって制御される病原性遺伝子群の網羅的同定
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15208005
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
柘植 尚志 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 教授 (30192644)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉岡 博文 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 助手 (30240245)
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| Keywords | 植物病原糸状菌 / Fusarium oxysporum / メロンつる割病菌 / 病原性関連遺伝子 / 転写制御因子 / cDNAサブトラクション / 胞子形成関連遺伝子 |
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| Research Abstract |
先に研究代表者らは、Fusarium oxysporum病原菌のうちメロンつる割病菌(F.oxysporum f.sp.melonis)から、病原性に不可欠な転写制御因子をコードする2つの遺伝子(FOW2およびFOW3)を同定した。本研究の目的は、これら遺伝子によって制御される病原性関連遺伝子群をcDNAサブトラクション法によって同定することである。これまでの成果を以下に要約する。
1.FOW2およびFOW3の発現様式と遺伝子産物の細胞内局在性
各種培地で培養した場合の両遺伝子の発現レベルを比較したところ、両遺伝子はほとんどの培地で低レベルながらも恒常的に発現することが明らかとなった。Fow2またはFow3と緑色蛍光タンパク質(GFP)との融合タンパク質発現ベクターを野生株に導入したところ、融合タンパク質が核に局在することが明らかとなり、両タンパク質が転写制御因子であることがさらに確認された。
2.Fow2によって制御される遺伝子の選抜
野生株と比較してfow2変異株で発現が低下した遺伝子のcDNAクローンを選抜するために、PCR-Selected cDNA Subtraction Kit(クロンテック社)を用いて、野生株cDNAからfow2変異株のcDNAをサブストラクトしたライブラリーを作製した。分離した1054個のcDNAクローンについて、野生株とfow2変異株のmRNAをプローブとしてcDNAドットブロット解析を行い、変異株で発現レベルが低下している96クローンを1次選抜した。さらに、これら96クローンについて同様にcDNAドットブロット解析を行い、28クローンを2次選抜した。現在、これらクローンについて遺伝子破壊株を作出し、病原性における機能の解析を進めている。
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