2004 Fiscal Year Annual Research Report
標識体をナノリアクターに利用する高感度な化学発光分析システムの構築
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15350038
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| Research Institution | HOKKAIDO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
上舘 民夫 北海道大学, 大学院・工学研究科, 教授 (70185990)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
谷 博文 北海道大学, 大学院・工学研究科, 助教授 (10271644)
石田 晃彦 北海道大学, 大学院・工学研究科, 助手 (20312382)
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| Keywords | リポソーム / ナノリアクター / 化学発光反応 / ペルオキシダーゼ / ルミノール / イムノアッセイ / ホモゲンチジン酸γ-ラクトン |
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| Research Abstract |
リポソームの内水相をナノリアクターとして応用するため、西洋わさび由来のペルオキシターゼ(HRP)を内封したリポソームを調製した。リポソームはフォスファチジルコリン(PC)、フォスファチジルグリセロール(PG)およびコレステロール(Chol)の3成分からなり、押出し法により調製した。3成分の組成はPC:PG:Chol=8:1:1とした。なお、HRP内封リポソームの平均粒子径は約600nmであった。
最初に、リポソームの内水相においてHRPを触媒とする化学発光(CL)反応を行った。CL試薬にはHRPがCL反応の触媒として関与するフルオレセイン、ルミノールおよびホモゲンチジン酸γ-ラクトン(HAL)を用いた。実験はHRP内封リポソームの外水相にCL試薬と過酸化水素を加え、それらの試薬がリポソーム膜を透過し、リポソーム内でHRPの触媒作用により放出されるCLを観測した。用いるHRP内封リポソーム量が多い場合には、いずれのCL試薬も反応開始後、直ちにCLを発現した。しかしながら、用いるHRP内封リポソーム量が少なくなると、触媒であるHRP量が減少するため、HALを除いて発光速度は著しく減少した。
つぎに、HALを用いてHRP内封リポソームの使用量の影響をみた。発光量は使用量に依存し、調製したHRP内封リポソームを約8000倍希釈しても、HAL-CL反応はリポソーム内で迅速に進行した。HAL-CL反応系は従来使用されてきたルミノール系と比較して、測定時間および検量線の直線範囲において優れていた。
最後に、HRP内封リポソームをイムノアッセイの標識体に応用するため、測定容器に対する非特異的吸着について検討した。その結果、HRP未封入リポソームがマスキング剤として有用であった。以上の結果から、HRP内封リポソームをイムノアッセイの標識体に応用できることが明らかになった。
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Research Products
(1 results)
