2004 Fiscal Year Annual Research Report
発光ファージ法による重要植物病原細菌の迅速同定システムの開発
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15380034
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| Research Institution | Shizuoka University |
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Principal Investigator |
露無 慎二 静岡大学, 農学部, 教授 (30090541)
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| Keywords | 発光遺伝子 / ファージ / ナス科植物青枯れ病菌 / カンキツかいよう病菌 / レポーターファージ / 標識ファージ吸着法 |
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| Research Abstract |
ナス科植物青枯れ病菌Ralstonia solanacearumに感染するファージを単離し、ファージゲノムのシークエンス解析を行い、この内、リゾチーム生産構造遺伝子相同領域領域のクローンを得た。この領域に海洋細菌Vibrio fisheriiのルシフェラーゼ遺伝子luxA,B遺伝子を融合させたマーカーエクスチェンジ用プラスミドを構築した。この時点で既に、基質テトラデカナールを添加後発光する事を確認でき、これをファージに相同組み換えで組換えファージを構築する事が出来た。また、ファージ粒子をビオチンで標識し、これを青枯れ病菌に吸着させた後に酵素標識ストレプトアビジンによって、10の2乗の青枯れ病菌を検出する事が出来た。また、カンキツかいよう病菌Xanthomonas axonopodis pv. citriに感染するCP1ファージについては、コートタンパク質遺伝子相同領域に上記luxA,Bを挿入する事により、また、直接臭化エチジウムで標識したファージ粒子を吸着させる事により、カンキツかいよう病菌を10の2乗まで検出できるようになった。
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[Book] 植物病の探究2004
Author(s)
露無慎二, 石原博道, 藤川貴史
Total Pages
188
Publisher
植物病の探究出版会
Description
「研究成果報告書概要(和文)」より
