2004 Fiscal Year Annual Research Report
次世代型2-5Aアンチセンス核酸の創製とその遺伝情報の制御
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15390036
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| Research Institution | Gifu University |
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Principal Investigator |
北出 幸夫 岐阜大学, 工学部, 教授 (20137061)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
上野 義仁 岐阜大学, 工学部, 助教授 (20250467)
中西 雅之 岐阜大学, 工学部, 助手 (00281048)
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| Keywords | 2-5A / アンチセンス核酸 / 2-5A-アンチセンス / リボヌクレアーゼ / 核酸オリゴマー / メッセンジャーRNA |
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| Research Abstract |
1)アデノシン8位にメチル基などを導入した2-5A誘導体[pApApAp(R8A):Rは導入した置換基を意味する]を合成し、RNase L活性化能を検討した。また、アデノシン糖部を開環したアシクロヌクレオシド誘導体を導入した2-5A誘導体を合成しそのRNase L活性化能を調べた。
2)前年度に引き続き細胞膜透過性の問題を解決するために、ペンタエリスリトールを介して、膜成分であるコレステロール、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸を結合させた誘導体を合成中である。
3)2'-O-メチルヌクレオシドを含むギャップマーから成る2-5Aキメラ型オリゴヌクレオチドを合成し、RNA切断効率を比較した。合成したキメラ型アンチセンスと相補鎖RNAとの二本鎖の熱的安定性をT_m(50%融解温度)を測定することにより比較した。
4)一方、RNase L自体の構造と機能についても検討を加えた。触媒部位と考えられる部位の変異酵素を作成し、そのヌクレアーゼ機能に与える影響に関して詳細に検討を加えた。また、RNase LのN-末部分の発現・精製し、その結晶化に成功した。その結果、2-5A分子との結合様式を明らかにすることに成功した。
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