2004 Fiscal Year Annual Research Report
ユビキチンプロテアソーム系の応用による細胞内寄生原虫に対するDNAワクチンの開発
| Project/Area Number |
15390136
|
|---|
| Research Institution | Kyushu University |
|---|
Principal Investigator |
姫野 國祐 九州大学, 大学院・医学研究院, 教授 (50112339)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
久枝 一 九州大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (50243689)
濱野 真二郎 九州大学, 大学院・医学研究院, 助手 (70294915)
|
|---|
| Keywords | DNAワクチン / 細胞内寄生原虫 / トキソプラズマ / SAG-1 / ユビキチン融合遺伝子 / CD8^+T細胞 / プロテアソーム阻害剤 / PA28ノックアウトマウス |
|---|
| Research Abstract |
1)ワクチンベクター及びサイトカイン発現ベクター構築
ワクチン抗原(トキソプラズマ原虫SAGl)をコードする遺伝子をユビキチン遺伝子とフュージョンした遺伝子(pcDNAUB-SAGl)でMHC class I依存性の免疫を誘導した。
2)マウスモデルにおけるワクチンベクター導入効果の検討
マウスに対して、「フュージョンベクター」DNAワクチンを行った。ワクチンには生体への遺伝子導入効率に優れた遺伝子銃を用いた。ワクチン後、同蛋白に対する特異抗体価、リンパ球の抗原特異的増殖反応・サイトカイン産生及び細胞傷害活性について解析を行い、「フュージョンベクターによるDNAワクチン」の免疫誘導能並びにその特徴を明らかにした。
3)マウスモデルにおけるワクチンベクターのユビキチンプロテアソーム経路への関与の検討
マウスに対して、遺伝子銃を用いて「フュージョンベクター」DNAワクチンを行った。抗原提示細胞としてマクロファージ由来PMJ2-PC細胞等へワクチンベクターの遺伝子導入を行い、ワクチン後マウス脾細胞と共培養し、サイトカイン産生及び細胞傷害活性について解析を行った。その際、プロテアソーム阻害剤であるMG-132,エポキソマイシン等を用いることで、抗原提示におけるユビキチン-プロテアソーム経路の重要性について詳細に確認した。
4)PA28α-/-β-/-及び免疫プロテアソームノックアウト(LMP7ko)マウスにおけるワクチンベクター導入効果の検討
プロテアソームアクティベーターPA28あるいは免疫プロテアソームLMP7欠損マウスを用いてユビキチンプロテアソーム経路の影響についてin vivoでの詳細な解析を行った。その結果、SAGlに対するCD8^+CTLの誘導には、PA28は関与してないが、LMP7が必須の関わりを持つことが明らかとなった。
|
