感染宿主細胞を修飾し支配するトリパノソーマの分子戦略

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15390138
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 青木 孝 順天堂大学, 医学部, 教授 (20053283)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 吉田 彩子 順天堂大学, 医学部, 助手 (20343486) ; 奈良 武司 順天堂大学, 医学部, 講師 (40276473) ; 嶋田 淳子 順天堂大学, 医学部, 講師 (20211964)
• Keywords: Trypanosoma cruzi / Fasシグナル伝達系 / アポトーシス抑制 / c FLIP / DNAマイクロアレイ / ピリミジン生合成第1酵素 / 原虫-宿主たんぱく質相互作用 / ファージデイスプレイ

Research Abstract

これまでの研究からTrypanosoma cruzi感染はFasを介するアポトーシスのシグナル伝達経路の初期過程を抑制することを明らかにした。1-a)そこで、T.cruzi感染、非感染細胞のアポトーシス関連遺伝子について転写レベルの差異をDNAマイクロアレイ(DNAチップ)法により解析し、感染細胞で有意に発現上昇あるいは低下した遺伝子を見出した。1-b)その内、カスペース-8様インヒビター(cFLIP)はFas連関アポトーシス抑制の初期過程に関わると推定され、感染細胞においてタンパク質レベルの著しい上昇が見られたので、本計画の有望な候補分子と考え、転写レベルおよび翻訳たんぱく質レベルについて詳細な解析を行ないつつある。このようにして宿主細胞内で生き延びる原虫に、2-a)ピリミジン合成経路初段酵素CPS II遺伝子の組換えベクターを導入して過剰発現T.cruzi原虫株を作出し、一感染宿主細胞および感染マウス体内における増殖速度および病原性の相違を調べ、マウスにおける増殖速度および病原性の上昇を認めた。3-a) T.cruziのamastigoesからES抗原を調製し、それを結合させたマイクロタイタープレート・ウエルに、ヒト心筋タンパク質'(cDNA由来)を表面に発現しているファージ(ファージデイスプレイと呼ぶ)を加えて、原虫抗原-心筋タンパク質間の相互作用を利用してファージクローンを相当数単離した。得られた多数のクローンから主なものを選び、cDNAの塩基配列決定・データベースの検索によって、原虫タンパク質と結合するヒト心筋タンパク質(多数)を同定する準備が整ってきた。以上のように、感染宿主細胞を修飾し支配するトリパノソーマの分子戦略の研究は、3方面から順調に進んでいる。

Research Products

• [Publications] Asaruddin MR, (Aoki T)他4名: "Trypanocidal constituents from Michelia alba"Natural Medicines. 57. 61-63 (2003)
• [Publications] Nara T, (Aoki T) 他4名: "Diversity of aspartate carbamoyltransferase genes of Trypanosoma cruzi"Int J Parasitol. 33. 845-852 (2003)
• [Publications] Aoki T: "Metabolism of parasitic protozoa"In : Progress of Medical Parasitology in Japan. 7. 175-191 (2003)
• [Publications] 橋本宗明, 嶋田淳子, 青木孝: "Trypanosoma cruzi感染細胞におけるFasを介するアポトーシス制御に対するcellular FLIPの関与"第72回日本寄生虫学会大会プログラム・抄録集. 106 (2003)
• [Publications] 奈良武司, 三上由祐子, 青木孝: "Trypanosoma cruziのカルバモイルリン酸合成酵素II(CPS II)遺伝子導入株の解析"第72回日本寄生虫学会大会プログラム・抄録集. 84 (2003)
• [Publications] 案浦健 (青木孝) 他2名: "キネトプラスト目原虫におけるピリミジン合成経路第4酵素dihydroorotate dehydrogenaseの分子進化学的解析"第72回日本寄生虫学会大会プログラム・抄録集. 84 (2003)