2003 Fiscal Year Annual Research Report
EBウイルスがコードする機能性RNA分子EBERの研究
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15390147
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
高田 賢蔵 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 教授 (30133721)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
南保 明日香 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助手 (60359487)
岩切 大 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助手 (10307853)
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| Keywords | EBウイルス / EBER / トランスフォーメーション / Bリンパ球 / 組み換えウイルス |
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| Research Abstract |
EBウイルス(EBV)がコードするポリA(-)の小RNA(EBER)は、EBV感染細胞において、細胞増殖能の亢進やアポトーシス抵抗性を賦与することが明らかとなっている。また、EBER遺伝子を欠損した組換えEBVを用いた解析により、EBERはEBVの複製、および細胞の不死化活性に影響がないことが示されていた。
本研究では、Cre/loxPシステムを用いた組換えEBV作成法により、EBERノックアウトEBVを作製し、作製した組換えEBVのBリンパ球トランスフォーメーション効率を定量的に調べることを目的とした。
EBERノックアウトEBVと野生型EBVを臍帯血リンパ球へ接種し、6週間培養後の不死化リンパ球の出現を観察した。ウイルス接種後2日後に、EBV特異的核抗原EBNAの免疫染色を行いBリンパ球への感染効率を比較した結果、EBERはEBVの感染効率に影響を与えないことが明らかになった。また、ウイルス接種後に感染細胞を低細胞密度で培養した場合に、野生型EBVと比較してEBERノックアウトEBV感染細胞の増殖能が著しく低下することが示された。さらに、EBERノックアウトEBVのトランスフォーメーション効率は野生型EBVと比較して約100倍低下することが明らかとなった。
そこで、EBER遺伝子をEBVゲノム上に再導入した組換えEBV(EBER再導入EBV)を作製し、EBERの再導入によって組換えEBVのBリンパ球トランスフォーメーション効率が回復するかどうかを検討した。その結果、EBER再導入EBVのトランスフォーメーション効率は野生型EBVとほぼ同程度まで回復した。
以上のことから、EBERがEBVによる効率的な細胞の形質転換に寄与している可能性が示唆された。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Iwakiri, D.: "Autocrine growth of Epstein-Barr virus (EBV)-positive gastric carcinoma mediated by an EBV-encoded small RNA"Cancer Res.. 63. 7062-7067 (2003)
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[Publications] Yang, L.: "Epstein-Barr virus infection of rat lymphocytes expressing human CD21 results in restricted latent viral gene expression but not in immunoblastic transformation"J.Med.Virol.. 70. 126-130 (2003)
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[Publications] Sheng, W.: "Malignant transformation of Epstein-Barr virus-negative Akata cells by introduction of the BARF1 gene carried by Epstein-Barr virus"J.Virol.. 77. 3859-3865 (2003)
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[Publications] Kiss, C.: "T cell leukemia I oncogene expression depends on the presence of Epstein-Barr virus in the virus-carrying Burkitt lymphoma lines"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 100. 4813-4818 (2003)
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[Publications] Iwakiri, D.: "Phosphatidylinositol 3 kinase is a determinant of responsiveness to B cell antigen receptor-mediated Epstein-Barr virus activation"J.Immunol.. 172. 1561-1566 (2004)
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[Publications] Trivedi, P.: "Infection of HHV-8 positive primary effusion lymphoma cells with a recombinant Epstein-Barr virus leads to restricted EBV latency, altered phenotype and increased tumorigenicity without affecting TCL1 expression"Blood. 103. 313-316 (2004)
