新たなPPARγ応答性分泌蛋白による摂食調節機構に関する研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15390291
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 森 昌朋 群馬大学, 医学部, 教授 (80174382)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山田 正信 群馬大学, 医学部, 講師 (90261833) ; 清水 弘行 群馬大学, 医学部, 講師 (20251100)
• Keywords: PPARγ / 食欲調節 / 脂肪細胞 / 視床下部 / N-associated protein

Research Abstract

脂肪細胞由来のいくつかの生理活性物質はPPARγにより制御され、脳内に局在する。PPARγ活性化剤のTroglitazone(TGZ)により増加する新たな分泌蛋白を見出し、その食欲調節作用を検討する。方法と成績:(1)TGZ添加群と非添加群の肺癌細胞由来SQ-5細胞からmRNAを調整し、Subtraction cloning assayを行い、TGZで増加する遺伝子596クローンを同定した。(2)それらの遺伝子coding regionに分泌signal sequenceを有している蛋白質を9クローン得た。それらの中で実際にSQ-5細胞においてTGZでmRNA発現が著明に亢進する1クローンを得た。この蛋白質は24アミノ酸のsignal sequenceを有する全長396アミノ酸からなっていた。(3)このクローンは神経芽細胞種由来のHTB185細胞でも発現しており、TGZ添加により増加した。(4)この蛋白質はPCによるprocessing site(KR/RR)が3箇所存在するので、その切断部位に相当する4種類のpeptideを合成し、家兎に免疫することにより抗体を得た。(5)それらの抗体を用いてラット脳の免疫染色を行ったところ、摂食と関係する視床下部室傍核、弓状核等に強い免疫染色性が認められた。これらの蛋白質をN-associated protein(NAP)と命名し、processingを受けて生ずると想定される各蛋白質をNAP-1〜4と命名した。ラット脳内の免疫染色性は抗NAP-1/2抗体で強く、抗NAP-3/4抗体では非常に弱い染色性であった。またNAP-1/2の発現と、PC-2の発現は共染したことから、PC-2によりNAPはprocessingを受ける事が示唆された。(6)明期に抗NAP-1/2の各IgG抗体を無麻酔下でラット脳内に投与したところ、その食餌摂取量は、対象IgG投与群に比較して著明に増加しており、その増加は6時間持続した。一方抗NAP-3/4IgG投与による摂食量に有意の変化を認めなかった。(7)48時間絶食させたラット視床下部におけるNAP mRNA発現量の変化を検討するためantisense-NAP cRNAを用いて、in situ hybridyzationを行った結果、対照群に比し絶食群の視床下部室傍核NAP mRNAは著明に減少していた。現在の結論:PPARγ応答性分泌蛋白NAPが新たに同定され、それらは脳視床下部に局在し、PCによりprocessingを受け、食欲調節に抑制性に作用する可能性が示唆された。

Research Products

• [Publications] Mizuide M, et al.: "Two short segments of smad 3 are important for specific interaction of smad 3 with c-ski and snoN."J Biol Chem. 278. 531-536 (2003)
• [Publications] Tsuchiya T, et al.: "Troglitazone inhibits isolated cell proliferation, and induces apoptosis in isolated rat mesangial cells."Am J Nephrol. 23. 222-228 (2003)
• [Publications] Areki O, et al.: "Expression of type 2 iodothyronine deiodinase in corticotropine-secreting mouse pituitary tumor cells is stimulated by glucocorticoid and Corticotropin-releasing hormone."Endocrinology. 144. 4459-4465 (2003)
• [Publications] Saito T, et al.: "Syntaxin 4 and synip (syntaxin 4 interacting protein) regulate insulin secretion in the pancreatic beta HC-9cell."J Biol Chem. 278. 36718-36725 (2003)