MHC純系ミニブタを用いた胸腺移植併用臓器移植による免疫寛容誘導に関する研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15390387
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: National Cardiovascular Center Research Institute
• Principal Investigator: 佐田 正晴 国立循環器病センター研究所, 再生医療部, 室長 (20162399)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高原 史郎 大阪大学, 大学院・医学系研究科・泌尿器科, 助教授 (70179547) ; 藤里 俊哉 国立循環器病センター研究所, 再生医療部, 室長 (60270732)
• Keywords: SLA class I, II / PCR-RFLP / genotyping / RT-PCR / miniature pig / SBT / PCR-SSP

Research Abstract

人為的に免疫寛容を導入するための臓器移植実験にはドナー・レシピエントに用いるミニブタのMHC遺伝子の同定と解析が不可欠である。そのた本研究の臓器移植実験に用いるクラウンミニブタのSLA遺伝子の同定とSLA遺伝子純系ミニブタ家系の樹立を目的にクラウンミニブSLA class I,II遺伝子の解析と簡易同定法の確立を行った。SLA class I遺伝子の塩基配列情報をもとにSLA class I発現遺伝子の6座(SLA-1,-2,-3,-6,-7,-8)につて各遺伝子座を特異的に増幅させるためのプライマーを設計した。なおクラウンミニブタSLA class I遺伝子解析のための対照としてメキシカンヘアレスとゲッチンゲン系交雑種の遺伝子解析を行った。全RNAを用い第2、第3エキソンのRT-PCR増幅産物をSBT法により多型性解析を行い、PD-1(SLA-1),PD14(SLA-2),PC1(SLA-3)cDNAクローン、SLA-3遺伝子クローンの塩基配列の同定と同時に、新対立遺伝子を見出した。SLA class II遺伝子はDRB1,DQB遺伝子については第2エキソンのRT-PCRを行いSBT法により塩基配列の決定を行った。SLA class I, I遺伝子の多型性を簡便に同定するためにSBT法による結果からそれぞれの遺伝子の各アリル特異的なプライマーを設計し、SLA-1、-2,-3遺伝子についてはPCR- SSP法、SLA-DRB1,-DQB遺伝子についてはPCR-RFLP法による簡易法を確立した。本法を用い100頭のクラウンミニブタSLA遺伝子の解析を行い6種のハプロタイプを確認すると同時にSLA遺伝子のホモ・ヘテロ組み合わせに基づいた交配により移植実験に享するためのSLA遺伝子純系ミニブタ家系の樹立が可能となった。

Research Products

• [Publications] T.Sugimoto, M.Sada, T.Miyamoto, H.Yao: "Genetic analysis of HLA loci In Japanese patients with abdominal aortic aneurysm"Eur J Vasc Endovasc Surg. 26. 215-218 (2003)
• [Publications] A.Ando, H.Kawata, M.Sada, et al.: "Genetic polymorphism of swine major histocompatibility complex (SLA) class I genes, SLA-1,-2 and -3"Immunogeneics. 55. 583-593 (2003)
• [Publications] T.Takao, A.Tsujimura, M.Sada, R.Goto et al.: "Susceptibility gene for non-obstructive azoospermia In the HLA clas II region : correlations with Y chromosome microdeletion and spermatogenesisi"International Journal of Andorology. 27. 37-41 (2004)
• [Publications] Barth RN, Yamamoto S, LaMattina JC, K.Yamada et al.: "Xenogeneic thymokidney and thymic tissue transplantation in a pig-to-baboon model : I. Evidence for pig-specific T-cell unresponsiveness"Transplantation. 75-10. 11615-1624 (2003)
• [Publications] Mueller NJ, Sulling K, Gollackner B, K.Yamada et al.: "Reduced efficacy of ganciclovir against porcine and baboon cytomegalovirus in pig-to-baboon xenotransplantation"Am J Transplant. 3-9. 1057-1064 (2003)
• [Publications] Mezrich JD, Kesselheim JA, Johnston DR, K.Yamada: "The role of regulatory cells in miniature swine rendered tolerant to cardiac a lografts by donor kidney cotransplantation"Transplantation. 75-9. 1107-1115 (2003)