膜型メタロプロテアーゼおよびEBV抗原を標的とした頭頚部がん分子標的療法開発

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15390514
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 吉崎 智一 金沢大学, 医学部附属病院, 講師 (70262582)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 室野 重之 金沢大学, 医学部附属病院, 助手 (20345622) ; 古川 仭 金沢大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (40092803)
• Keywords: 頭頸部がん / 分子標的 / MMP / 上咽頭がん / LMP1

Research Abstract

1)ヒト腎臓由来培養細胞株HEK293とそれに膜型マトリックスメタロプロテアーゼ1(MT1-MMP)FLAG発現ベクターを形質導入した293-MT1-FLAGを用い、MT1-MMPタンパクの細胞内動態を観察した。結果:細胞膜上に発現したMT1-MMPタンパクは、約1時間後にリソゾームで分解される。
2)抗MT1-MMPマウスモノクローナル抗体114F1に131IをクロラミンT法でラベルして上記2種類の細胞に対する殺細胞効果および増殖抑制効果を検討した。方法:培養液のみ、抗体単独、131I単独、抗体+131I、131Iをラベルした抗体、各々の条件で、293細胞および293-MT1-FLAGに対するコロニー形成率を比較した。結果:この条件では、いずれの群の間にも、コロニー形成率に差を認めなかった。
3)293-MT1-FLAG細胞の表面にMT1-MMPの阻害剤BB94を作用させるとMT1-MMPタンパクの発現が増えることが判明した。
4)Epstein-Barrウイルス(EBV)がん遺伝子LMP1は387アミノ酸からなる上咽頭がん細胞膜を貫通する膜タンパクである。このLMP1に対する分子標的治療として、抗LMP1抗体を用いる方法が可能かどうか検討した。結果:これまでに報告されている抗LMP1抗体は細胞内領域のアミノ酸配列をエピトープとしたものばかりである。生体内で発現するLMP1を認識するためにはLMP1の細胞外領域を認識する必要がある。そこで、LMP1の細胞外領域に存在するアミノ酸配列を検討したところ、1領域6-7アミノ酸のものが3領域あるのみで、この領域を特異的に認識する抗体の作成は極めて困難であること、また、作成してもアフィニティーは低く治療目的には使用不可能であることが判明した。