2004 Fiscal Year Annual Research Report
膜型メタロプロテアーゼおよびEBV抗原を標的とした頭頸部がん分子標的症法開発
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15390514
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
吉崎 智一 金沢大学, 医学部附属病院, 講師 (70262582)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
室野 重之 金沢大学, 医学部附属病院, 助手 (20345622)
古川 仭 金沢大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (40092803)
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| Keywords | EBウイルス / MMP / 抗体 / LMP1 / MMP阻害剤 |
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| Research Abstract |
1)ヒト腎臓由来培養細胞株HEK293とそれに膜型マトリックスメタロプロテアーゼ1(MT1-MMP)FLAG発現ベクターを形質導入した293-MT1-FLAGを用い、MT1-MMPタンパクの細胞内動態を観察した結果、細胞膜上に発現したMT1-MMPタンパクは、約1時間後にリソゾームで分解された。
2)抗MT1-MMPマウスモノクローナル抗体114F1に131IをクロラミンT法でラベルして上記2種類の細胞に対する殺細胞効果および増殖抑制効果を検討した。方法:培養液のみ、抗体単独、131I単独、抗体+131I、131Iをラベルした抗体、各々の条件で、293細胞および293-MT1-FLAGに対するコロニー形成率を比較した。この条件では、いずれの群の間にも、コロニー形成率に差を認めなかった。
3)293-MT1-FLAG細胞の表面にMT1-MMPの阻害剤BB94を作用させるとMT1-MMPタンパクの発現が増えることが判明した。今年はフローサイトメトリーを用いて検討したところ、10μgMT1-MMP抗体ではBB94を用いても抗体結合率は上昇しないが100μgの抗体を入れると、細胞膜表面への抗体の結合は10-20%上昇する。
4)Epstein Barrウイルス(EBV)がん遺伝子LMP1は387アミノ酸からなる上咽頭がん細胞膜を貫通する膜タンパクである。このLMP1に対する分子標的治療として、抗LMP1抗体を用いる方法が可能かどうか検討した。これまでにLMP1の細胞外領域に存在するアミノ酸配列を検討したところ、1領域6-7アミノ酸のものが3領域あるのみで、この領域を特異的に認識する抗体の作成は極めて困難であること、また、作成してもアフィニティーは低く治療目的には使用不可能であることが判明した。今回ヒト血清中にLMP1と発現する免疫グロブリンが存在するか蛍光抗体法を用いて検討したが、ヒト血清中には、LMP1に反応する抗体は検出されなかった。
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