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2004 Fiscal Year Annual Research Report

Toll様受容体による口腔微生物由来リポペプチド認識機構の解明

Research Project

Project/Area Number 15390549
Research InstitutionHokkaido University

Principal Investigator

柴田 健一郎  北海道大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (50145265)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 黒木 由夫  札幌医科大学, 医学部, 教授 (70161784)
安田 元昭  北海道大学, 大学院・歯学研究科, 助教授 (90239765)
KeywordsToll-like receptor / リポペプチド / リポタンパク質 / ペプチドグリカン / アポトーシス
Research Abstract

Toll-like receptor2(TLR2)は微生物由来リポタンパク質(LP)、リポペプチドならびにペプチドグリカン(PGN)の認識部位について検討した。
LPはM.salivariumから調製し、リポペプチドはLPの活性部位であるN末端リポペプチドS-(2,3-bispalmitoyloxypropyl)CGDPKHPKSF(FSL-1)を合成し、またPGNはS.aureus由来の市販品を用いた。ヒトTLR2をクローニングし、種々の点変異体(L107E、L112E、L115E、L123E、L132E、E178A、E180A、E190A)を作成した。これらの遺伝子をNF-κBレポーター遺伝子と共にHEK293細胞に導入し、リガンドによるNF-κBの活性化をルシフェラーゼ活性で評価した。TLR2ならびに変異体の細胞表面での発現は共焦点レーザー走査顕微鏡およびFlow Cytometryで確認した。
まず、FSL-1の構造とTLR2による認識機構を解明するために、、FSL-1のペプチドならびに脂肪酸部分の変異体を作成し、TLR2による認識を調べた。その結果、FSL-1のペプチド部分ならびに脂肪酸部分の双方がTLR2で認識されることがわかった。
野生型および変異型TLR2(E180A、E190A、L123E、L132E)のtransfectantでは、LP、FSL-1ならびにPGN刺激によってNF-κBの活性化が誘導されたが、L107E、L112EならびにL115Eでは、NF-κBの活性化が誘導されなかった。これらの変異体は野生型TLR2と同様に細胞表面に発現していた。
以上のことより、TLR2のひとつのロイシンリッチリピートに存在する107、112、115番目のロイシン残基はLP、FSL-1およびPGNの認識に関与しているということが推測される。TLR2の細胞外ドメインには8個のロイシンリッチリピート(LRR)が存在し、これらのロイシン残基は第3番目のLRRに存在する。そこで、第3番目以外のLRRに存在するロイシン残基の関与も調べた。その結果、全てのLRRには1個の認識に関与するロイシン残基が存在し、それらはLRRのconstant regionに存在することがわかった。
さらに、TLR2ならびにTLR6を導入したHEK293細胞をLPで刺激するとアポトーシスが誘導され、そのメカニズムの一部も明らかにした。

  • Research Products

    (6 results)

All 2004 2003

All Journal Article (6 results)

  • [Journal Article] Stimulation of human Toll-like receptor(TLR) 2 and TLR6 with membrane lipoproteins of Mycoplasma fermentans induces apoptotic cell death after NF-kappaB activation2004

    • Author(s)
      T.Into, K.Kiura, M.Yasuda, H.Kataoka, N.Inoue, A.Hasebe, K.Takeda, S.Akira, K.Shibata
    • Journal Title

      Cellular Microbiology 6(2)

      Pages: 187-199

  • [Journal Article] Relationship between structures and biological activities of mycoplasmal diacylated lipopeptides and their recognition by Toll-like receptors 2 and 62004

    • Author(s)
      T.Okusawa, M.Fujita, ----K.Shibata
    • Journal Title

      Infection and Immunity 72・3

      Pages: 1657-1665

  • [Journal Article] Biological activities of Bacteroides forsythus lipoproteins and their possible pathological roles in periodontal disease2004

    • Author(s)
      A.Hasebe, A.Yoshimura-----K.Shibata
    • Journal Title

      Infection and Immunity 72・3

      Pages: 1318-1325

  • [Journal Article] Structure-function relationship of mycoplasmal lipoproteins/lipopeptides and their recognition by Toll-like receptor 2.2004

    • Author(s)
      Ken-ichiro Shibata, Mari Fujita, Manabu Morita
    • Journal Title

      Journal of Oral Bioscience 46・3

      Pages: 203-220

  • [Journal Article] Possible roles of Toll-like receptor 2/6 and extracellular ATP in mycoplasmal lipoprpotein-induced cell activation and death2004

    • Author(s)
      T.Into, K.Shibata
    • Journal Title

      Journal of Oral Bioscience 46・4

      Pages: 278-288

  • [Journal Article] Involvement of leucine residues at positions 107,112 and 115 in a leucine-rich repeat motif of human Toll-like receptor 2 in the recognition of diacylated lipoproteins and liopeptides and Staphylococcus aureus peptidoglycans2003

    • Author(s)
      M.Fujita, T.Into, M.Yasuda, T.Okusawa, S.Hamahira, Y.Kuroki, A.Eto, T.Nisizawa, M.Morita, K.Shibata.
    • Journal Title

      Journal of Immunology 171

      Pages: 3675-3683

URL: 

Published: 2006-07-12   Modified: 2016-04-21  

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