エフェクターRNAによるRNAポリメラーゼの活性制御

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15570150
• Research Institution: Nippon Institute for Biological Science
• Principal Investigator: 本田 文江 財団法人日本生物科学研究所, 研究部, 研究員 (80343747)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 石浜 明 財団法人日本生物科学研究所, 研究部, 主任研究員 (80019869)
• Keywords: インフルエンザウイルス / RNAポリメラーゼ / エフェクターRNA / 酵素活性制御 / 転写活性 / RNA構造 / RNAエンドヌクレアーゼ

Research Abstract

インフルエンザウイルスの8分節のマイナス鎖RNAゲノムは、3'、5'末端の塩基配列は保存され、相補的で、末端で二重鎖構造を形成している。我々は先に、ウイルス粒子内でウイルスRNAポリメラーゼはこの部位に結合していることを示した。転写と複製の何れにも関与しているインフルエンザウイルスRNAポリメラーゼが、3数類のウイルス蛋白(PB1,PB2,PA)から構成されていることを証明したので、組換えバキュロウイルスの系を用いて発現精製に成功した。しかし転写のプライマーを形成するエンヌクレアーゼ活性を調べたところ、活性が検出されなかった。ところがウイルスRNA(vRNA)を添加したところエンドヌクレアーゼ活性が検出された。相補鎖RNA(cRNA)は、RNAポリメラーゼの活性化には無効であった。こうした現象を基礎に、我々は、vRNAがRNAポリメラーゼの活性調節のエフェクターであるとの、新しい概念を提唱したvRNAとcRNAの2種類のRNAの末端2本鎖の構造には大きな違いがある。2種類のRNAの各種のキメラを形成し、RNAポリメラーゼの活性化に必要な素構造を検索した。

Research Products

• [Publications] Kolpashchikov, D., Honda, A., Ishihama, A.: "Structure-Function Relationships of Influenza Virus RNA Polymerase : Primer-binding Site on PB1 Subunit."Biochemistry. (In press). (2004)
• [Publications] Honda, A., Ishihama, A.: "Structure-function relationships of inlfuenza virus RNA polymerase."Options for Control of Influenza V. (In press). (2004)
• [Publications] 本田文江, 石浜 明: "RNAゲノムの転写と複製:インフルエンザウイルスRNAポリメラーゼの機能"蛋白核酸酵素. (印刷中). (2004)