7回膜貫通型オーファン受容体の新規機能解析法確立とリガンド探索

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15590095
• Research Institution: National Research Institute for Child Health and Development
• Principal Investigator: 平澤 明 国立成育医療センター研究所, 薬剤治療研究部, 室長 (70242633)
• Keywords: オーファン受容体 / リガンド探索 / GFP / データベース / 細胞内局在

Research Abstract

本研究では、申請者が従来から確立してきた、受容体の細胞内局在の解析、シグナル伝達の解析、遺伝子発現プロファイル解析の三つの技術を組み合わせ、オーファン受容体について、リガンド・機能探索を行う実験系を確立し、生理的な機能を明らかにすることを目的としている。今年度は、以下の3項目について検討するとともに、一部の受容体についてはリガンド探索を行った。1.「オーファン受容体の取得とGFP融合受容体発現細胞の確立」は、「45種類のオーファン受容体の遺伝子を入手し、それぞれのGFP融合キメラ受容体を作成、Flp-Inシステムを用いることで、20種類の受容体については、培養細胞株を確立した。2.「受容体細胞内局在解析によるスクリーニング系の確立」に関しては、Cellomics社製のArrayScanIIを用いてGFP標識受容体および、ConAによる細胞膜標識などを組み合わせて、細胞表面および、細胞内の受容体由来の蛍光を定量的に解析できるシステムを確立した。このシステムを用いることにより、アゴニスト依存的な細胞内移行が起これば、受容体のシグナル経路に寄らず、リガンド探索をできる実験系が確立できたことになる。3.「統合データベースの構築」に関しては、1,2項の実験解析作業に関して蓄積される多量のデータを取り扱える簡便なシステムを構築し、効率的に作業を進めることができた。また、確立した培養細胞株を用いてのリガンド探索を、脂質リガンド、各種ペプチド分画および、培養上清について行った。その結果、脂質をリガンド候補とする新規受容体を同定することができ、現在その生理機能について詳細な解析を行っている段階である。

Research Products

• [Publications] Katsuma S, Shiojima S, Hirasawa A, Tanoue A, Yano J, Tsujimoto G, et al.: "Transcriptional profiling of gene expression patterns during sphingosine 1-phosphate-induced mesangial cell proliferation."Biochem Biophys Res Commun.. 300. 577-584 (2003)
• [Publications] Shibata K, Katsuma S, Koshimizu T, Shinoura H, Hirasawa A, Tanoue A, Tsujimoto G: "Alpha 1-adrenergic receptor subtypes differentially control the cell cycle of transfected CHO cells through a cAMP-dependent mechanism involving p27Kip1."J Biol Chem.. 278. 672-678 (2003)
• [Publications] Yoshida N, Sugiyama M, Tanoue A, Hirasawa A, Tsujjimoto G: "Determination of a novel haplotype of beta 2 adrenergic receptor in the Japanese population by the combination of the electronic microchip assay using the nanoChip system with allelespecific PCR."Drug Metabolism and Pharmacokinetics.. 17. 532-539 (2003)
• [Publications] Ishiwata H, Katsuma S, Hirasawa A, Shiojima S, Tsujimoto G., et al.: "Characterization of Gene Expression Profiles in Early Bovine Pregnancy Using a Custom cDNA Microarray."Mol Reprod Dev.. 65. 9-18 (2003)
• [Publications] Koshimizu TA, Tanoue A, Hirasawa A, Yamauchi J, Tsujimoto G: "Recent advances in alpha1-adrenoceptor pharmacology."Pharmacology & Therapeutics.. 98. 235-244 (2003)
• [Publications] Nakamura T, Shiojima S, Hirasawa A, Katsuma S, Tsujimoto G, et al.: "Temporal gene expression changes of adipogenesis in human mesenchymal stem cells."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 303. 306-312 (2003)
• [Publications] Fukuhara Y, Hirasawa A, Tsujimoto G, et al.: "Gene expression profiles in the regenerating rata liver after partial hepatectomy."J Hepatology. 38. 784-792 (2003)
• [Publications] Yamada M, Hirasawa A, Shiojima S, Tsujimoto G: "Granzyme A mediates glucocorticoid-induced apoptosis in leukemia cells."FASEB Journal.. 17(12). 1712-1714 (2003)
• [Publications] Richardson J, Chatwin H, Hirasawa A, Tsujimoto G, Evans PD: "Agonist-specific coupling of a cloned human alpha(1A)-adrenoceptor to different second messenger pathways."Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol.. 367. 333-341 (2003)