重層培養細胞系によるヒト口腔粘膜細胞層の薬物透過機構の解析

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15590131
• Research Institution: OKAYAMA UNIVERSITY
• Principal Investigator: 木村 聰城郎 岡山大学, 薬学部, 教授 (10025710)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 檜垣 和孝 岡山大学, 薬学部, 助教授 (60284080) ; 大河原 賢一 岡山大学, 大学院・自然科学研究科, 助手 (30291470)
• Keywords: 口腔粘膜 / 薬物透過性評価系 / HaCaT細胞 / 重層細胞 / 最適培養条件 / D-glucose輸送系

Research Abstract

本研究では、口腔粘膜における薬物透過機構の詳細を解析するため、ヒトケラチノサイト由来細胞(HaCaT)を用いて、評価に適した重層細胞の培養条件を確立し、種々の基礎的検討を行った。
培養したHaCaT細胞を用いて、glucoseの輸送能について検討を行った結果、細胞内への取り込みはL-glucoseに比べD-glucoseが有意に大きく、HaCaT細胞にD-glucose輸送に関与する輸送担体の存在が示唆された。そこで、抗SGLT1抗体や抗GLUT1〜3抗体を用いた免疫学的検討により、重層扁平上皮でのD-glucoseトランスポータの発現を解析したところ、SGLT1およびGLUT1〜3の発現が確認された。それにもかかわらず、すでに報告している口腔粘膜重層培養細胞層の場合と異なり、D-glucoseとL-glucoseの重層細胞層の透過に差が認められなかった点については、更なる解析が必要である。
多孔性フィルター上に重層を形成した培養細胞系を用いて、受動的に透過する親水性及び親油性の物質の透過を検討し、薬物の物理化学的性質と重層上皮の透過経路との関係について解析を行ったところ、mannitol、melatonin、estradiolの順に透過係数が大きくなり、親油性との相関が認められた。これは、HaCaT細胞が、受動輸送で透過する薬物の口腔粘膜透過性評価に有用であることを示唆する結果である。