β-カテニン/p53系による子宮内膜癌細胞の増殖制御及び分化誘導作用の解明

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15590313
• Research Institution: Kitasato University
• Principal Investigator: 三枝 信 北里大学, 医学部, 講師 (00265711)
• Keywords: β-カテニン / 子宮内膜癌 / p53 / p21 / p14 / TCF4

Research Abstract

平成15年度はβ-カテニン過剰発現によるp53蛋白発現誘導のメカニズムを解析した。12種の子宮内膜癌培養癌細胞におけるβ-カテニン遺伝子(exon 3)及びp53遺伝子(exons 5-9)の塩基配列を検索し、両者が野生型のIshikawa細胞を選択し以下の検索を行った。
1)Ishikawa細胞に変異型β-カテニン遺伝子をtransient transfection法で導入後、β-カテニン及びp53抗体で二重染色し蛍光顕微鏡で観察すると、β-カテニン過剰発現細胞で、内因性p53蛋白発現誘導が確認できた。
2)変異型β-カテニン遺伝子導入時におけるβ-カテニン/TCF複合体転写活性能は著しく亢進していた。
3)この転写活性はdominant-negative TCF4及びICATにより有意に抑制された。
4)活性型β-カテニン/TCF複合体はp53上流遺伝子であるp14ARFのpromoter活性をTCF4依存性に亢進させた。
5)変異型β-カテニン遺伝子導入によりp53下流遺伝子のp21WAF1の発現が亢進した。
6)western法にて、変異型β-カテニン過剰発現によりp14ARF, p53及びp21WAF1の蛋白発現増加が認められた。
以上の結果から、β-カテニン過剰発現によりβ-カテニン/TCF4複合体が形成され、この複合体がp14ARFのTCF binding siteを介してp14ARFの発現を誘導する。p14ARFはp53遺伝子発現を誘導し、結果として細胞周期停止作用を有すp21WAF1の発現を誘導する。現在、これらの生物学的意義を検索中である。