2003 Fiscal Year Annual Research Report
活性型GLP-1の特異測定法の確立と糖尿病治療薬GLP-1アナログの開発への応用
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15590503
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| Research Institution | Fukuoka University |
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Principal Investigator |
立石 カヨ子 福岡大学, 医学部, 助教授 (60179728)
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| Keywords | Glucagon-like peptide-1 / 活性型GLP-1 / 酵素免疫測定法 |
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| Research Abstract |
Glucagon-like peptide-1(GLP-1)は血中グルコース濃度依存的にインスリンを分泌する作用を持っており、その分泌動態と糖尿病治療への応用が注目されている。活性型のGLP-1(7-36)アミドとGLP-1(7-37)は生体内でそれぞれ不活性型のGLP-1(9-36)アミドとGLP-1(9-37)に分解される。活性型GLP-1特異側定系を確立するために、D-グルタミン酸とD-リジンの重合体(D-GL)のB細胞に対する免疫寛容作用を利用したsite-specific抗体作成法によりGLP-1(7-37)のN端部位に対する特異抗体を作成した。[方法]GLP-1(7-25)とkeyhole limpet hemocyaninの結合物で免疫を行い、2回目と3回目の免疫のそれぞれ3日前にGLP-1(11-25)-D-GLを投与した。
[結果]1.兎で得られたポリクロナール抗体(R301,R302)の特異性は^<125>I標識GLP-1(7-36)アミドを用いた競合ラジオイムノアツセイで検定した結果、GLP-1(9-37)との交差性は0.05%以下で、N端部位を認識する特異抗体であった。一方、従来の免疫法で得られた抗体(D-GL結合物の無投与群)では100%の交差性を示し、活性型と不活性型を識別できなかった。2.GLP-1(7-36)アミド-KLHの免疫で得られたモノクローナル抗体クローン群からプレートに固相化したR301とサンドイッチ測定系が確立できる株を得た。この抗体はGLP-1(7-36)アミドとGLP-1(7-37)に同等に反応し、C末アミドは識別しなかった。3.これらの抗体の組合せにより、不活性型GLP-1とは無反応で活性型のGLP-1(7-36)アミドとGLP-1(7-37)GLP-1の両方を特異的に測定する酵素免疫測定系を確立した。
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