血液凝固第VIII因子欠損マウスを用いた血友病Aに対する免疫寛容誘導療法の開発

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15591021
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 窓岩 清治 自治医科大学, 医学部, 講師 (70296119)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 坂田 洋一 自治医科大学, 医学部, 教授 (40129028) ; 小林 英司 自治医科大学, 医学部, 教授 (00245044)
• Keywords: 第VIII因子欠損マウス / 血友病A / 免疫寛容 / 新生児

Research Abstract

血友病新生児に対し血液凝固第VIII因子製剤を投与することにより、永続的な免疫寛容を誘導する可能性について、第VIII因子欠損新生児マウス(新生児血友病マウス)を用いて検討した。(1)第VIII因子特異的免疫寛容血友病マウスモデルの作製:生後24時間以内の血友病マウスに対して、全身麻酔下で実体顕微鏡を用い頸静脈内にヒト第VIII因子を投与した。(2)新生児血友病マウスへの第VIII因子の投与量および初回投与時期の検討:新生児血友病マウスへのヒト第VIII因子の暴露時期および暴露量を検討した結果、0.05単位/kg体重のヒト第VIII因子を、出生後24時間以内に経静脈的に投与した場合に免疫寛容が成立するが、投与量を増加させた場合(0.1-0.5単位/kg体重)や初回投与時期を遅らせた場合(生後24-48時間,48-72時間)には、高力価の抗第VIII因子インヒビターが生じた。(3)本寛容マウスモデルに対してヒト第VIII因子以外の異種抗原(破傷風トキソイド等)の感作を行うと、投与された抗原に対する抗体が速やかに生じることから、成立した免疫寛容はヒト第VIII因子特異的であると考えられた。(4)新生児免疫寛容モデルから得た脾臓リンパ球は、in vitroでのヒト第VIII因子刺激によりIL-2の産生があるもののIL-4,IL-10,IFN-γの産生がなく、かつ増殖能も有さないが、IL-12の添加により増殖能の回復とIFN-γの産生が得られた。本年度の研究では、血友病マウス新生児に対してヒト第VIII因子特異的な免疫寛容を成立させる投与時期および投与方法を確立し、本モデルにおける免疫寛容の成立機序がIFN-γ依存性T細胞アネルギーであることを明らかにした。次年度は、ヒト第VIII因子特異的免疫寛容血友病マウスモデルを用いて、ヒト第VIII因子cDNAを単一遺伝子として搭載可能なウイルスベクター(simian immunodeficiency virus等)による遺伝子導入を組み合わせて、抗体産生を回避ながら持続的発現が可能な方策について検討する予定である。

Research Products

• [Publications] Madoiwa S: "Induction of immune tolerance by neonatal intravenous injection of human factor VIII in murine hemophilia A."J.Thromb.Haemost.2004 May issue. (in press).
• [Publications] Hamano A: "Thrombophilic dysfibrinogen Tokyo V with the amino acid substitution of γAla-327 to Thr : Formation of fragile but fibrinolysis-resistant fibrin clots and its relevance to arterial thromboembolism."Blood. (in press).
• [Publications] Kikuchi J: "Sustained transgene expression by human cord blood-derived CD34+ cells transduced with simian immunodeficiency virus agmTYO1-based vectors carrying the human coagulation factor VIII gene in NOD/SCID mice."J.Gene Med.. (in press).
• [Publications] Mimuro J: "Specific detection of human coagulation factor IX in cynomolgus macaques."J.Thromb.Haemost.. 2. 275-280 (2004)
• [Publications] Ogata K: "Expression of human coagulation factor VIII in adipocytes transduced with the simian immunodeficiency virus agmTYO1-based vector for hemophilia A gene therapy."Gene Ther.. 11. 253-259 (2004)
• [Publications] Mimuro J: "Hypofibrinogenemia caused by a nonsense mutation in the fibrinogen B β chain gene."J.Thromb.Haemost.. 1(11). 2356-2359 (2003)
• [Publications] Sigeta K: "In vitro platelet activation by an echo-contrast agent."J Ultrasound Med.. 22. 365-373 (2003)
• [Publications] Naito M: "Defective sorting to secretory vesicles in the trans Golgi network is partly responsible for protein C deficiency : Molecular mechanism of impaired secretion of abnormal protein C R169W, R352W and G376D."Circ.Res.. 92. 865-872 (2003)
• [Publications] Kaminishi Y: "Modified Bentall operation in a patient with hemophilia A."J.J.Thor Cardiovasc Surg. 51(2). 68-70 (2003)
• [Publications] 窓岩清治: "DIC:癌の凝固線溶系への挑戦"日本検査血液学会雑誌. 4(5). 44-51 (2003)
• [Publications] 窓岩清治: "DICの診断-線溶系マーカー(Novel molecular markers of fibrinolysis)"医学のあゆみ. 206. 81-85 (2003)