2003 Fiscal Year Annual Research Report

アデノ随伴ウイルスベクターを用いた血友病に対する遺伝子治療法の最適化

Research Project

Project/Area Number	15591022
Research Institution	Jichi Medical University
Principal Investigator	水上浩明自治医科大学, 医学部, 講師 (20311938)
Keywords	AAVベクター / 血清型 / 血友病B / 血友病A / 凝固第IX因子 / 凝固第VIII因子 / 抗体 / 脂肪組織
Research Abstract	各血清型のAAVに由来するベクター作製システムを準備し、マーカー並びにエリスロポエチン、凝固第IX因子などを搭載するベクターを作製した。以上を用いて主にマウスにおけるin vivoでの有効性を検討したところ、骨格筋では1型が、肝臓では5型及び8型を用いた場合に高い効果が得られた。この結果をもとに凝固第IX因子を搭載するベクターを作製し、ヌードマウスの骨格筋に遺伝子導入を行ったところ治療域に達する血中濃度を1年以上にわたって維持することが出来た。注入した骨格筋に対しては有意な影響は認められなかった。また、新規の標的組織として脂肪に対する投与法に関して探索を行い、生体に投与可能な添加剤(界面活性剤)をベクター溶液に加えることで脂肪組織に対する遺伝子導入効率が大幅に改善することを見出した。この方法によって肥満マウスモデルの脂肪組織にエリスロポエチン遺伝子を搭載したベクターによる遺伝子導入を行ったところ、血中エリスロポエチン濃度は大幅に上昇し、骨格筋及び肝臓を用いた場合にほぼ匹敵する結果が得られた。用いたマウスは著しい多血症を呈し、発現したエリスロポエチンが生物学的活性を有していることが裏付けられた。更にこれらのマウス脂肪組織を手術的に摘除したところ、遺伝子導入の効果は消失し、標的とした脂肪組織以外で導入遺伝子が発現している可能性をほぼ否定することが出来た。摘出した臓器を解析したところmRNA及び蛋白質レベルでも血中濃度と相関する結果が得られており、AAVベクターに添加剤を加えることの効果が裏付けられた。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Mizukami H, Okada T, et al.: "Separate control of Rep and Cap expression utilizing mutant and wild-type loxP sequence and improved packaging system for adeno-associated virus vector production."Mol Biotechnol. (in press).
[Publications] Mimuro J, Mizukami H, et al.: "Specific detection of human coagulation factor IX in cynomolgus macaques."J.Thromb Haemost. (in press).
[Publications] Takeda S, Takahashi M, et al.: "Successful Gene Transfer using Adeno-Associated Virus Vectors into the Kidney : Comparison among Adeno-Associated Virus Serotype 1 to 5 Vectors In Vitro and In Vivo."Nephron. (in press).
[Publications] Iwata N, Mizukami H, et al.: "Presynaptic localization of neprilysin contributes to efficient clearance of amyloid-beta peptide in mouse brain."J.Neurosci. 24(4). 991-998 (2004)
[Publications] Ideno J, Mizukami H, et al.: "Persistent phenotypic correction of central diabetes insipidus using adeno-associated virus vector-expressing arginine-vasopressin in brattleboro rats."Mol Ther. 8(6). 895-902 (2003)
[Publications] Kohno T, Mizukarni H, et al.: "Interleukin-10-mediated inhibition of angiogenesis and tumor growth in mice bearing VEGI producing ovarian cancer."Cancer Res. 63(16). 5091-5094 (2003)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

アデノ随伴ウイルスベクターを用いた血友病に対する遺伝子治療法の最適化

Principal Investigator

水上 浩明 自治医科大学, 医学部, 講師 (20311938)

Research Products

[Publications] Mizukami H, Okada T, et al.: "Separate control of Rep and Cap expression utilizing mutant and wild-type loxP sequence and improved packaging system for adeno-associated virus vector production."Mol Biotechnol. (in press).

[Publications] Mimuro J, Mizukami H, et al.: "Specific detection of human coagulation factor IX in cynomolgus macaques."J.Thromb Haemost. (in press).

[Publications] Takeda S, Takahashi M, et al.: "Successful Gene Transfer using Adeno-Associated Virus Vectors into the Kidney : Comparison among Adeno-Associated Virus Serotype 1 to 5 Vectors In Vitro and In Vivo."Nephron. (in press).

[Publications] Iwata N, Mizukami H, et al.: "Presynaptic localization of neprilysin contributes to efficient clearance of amyloid-beta peptide in mouse brain."J.Neurosci. 24(4). 991-998 (2004)

[Publications] Ideno J, Mizukami H, et al.: "Persistent phenotypic correction of central diabetes insipidus using adeno-associated virus vector-expressing arginine-vasopressin in brattleboro rats."Mol Ther. 8(6). 895-902 (2003)

[Publications] Kohno T, Mizukarni H, et al.: "Interleukin-10-mediated inhibition of angiogenesis and tumor growth in mice bearing VEGI producing ovarian cancer."Cancer Res. 63(16). 5091-5094 (2003)

水上浩明自治医科大学, 医学部, 講師 (20311938)