2003 Fiscal Year Annual Research Report
白血病関連転写因子PU.1のリン酸化・アセチル化による修飾制御と生物学的機能
| Project/Area Number |
15591032
|
|---|
| Research Institution | Sasaki Institute |
|---|
Principal Investigator |
根岸 文子 財団法人佐々木研究所, 細胞遺伝部, 研究員 (40177902)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
鈴木 光浩 財団法人佐々木研究所, 細胞遺伝部, 研究員 (00321662)
|
|---|
| Keywords | リン酸化 / アセチル化 / PU.1 / 血液細胞分化 / 白血病 |
|---|
| Research Abstract |
1.PU.1との結合に必要なmSin3Aの最小部位の決定
mSin3A(aa1-1219)を1-271,272-680,681-1219の3部位に分けたGST融合タンパク質を作製し、正常PU.1を用いてGST pull down assayを行ったところ、PH2およびPH3を含むaa272-680がmSin3AのPU.1結合部位であることがわかった。
2.変異PU.1を用いたPU.1のアセチル化の解析
正常PU.1を293T細胞に導入してin vivoでのアセチル化の有無を調べたところ、アセチル化されることが明らかとなった。そこで、アセチル化部位と推測されるリジンをアルギニンに変えたPU.1発現ベクターを3種類作製し、CBP・mSin3Aとの結合、転写の活性化および抑制化能を調べた。その結果、K223/224/244/245/247/248/249Rでは転写の抑制能が消失しており、mSin3Aとの結合も減少していた。以上のことから、PU.1のアセチル化が転写抑制に関与する可能性が示唆された。
3.変異PU.1を用いたPU.1のリン酸化の解析
正常PU.1を293T細胞に導入してin vivoでのリン酸化の有無を調べたところ、リン酸化されることがわかった。そこで、リン酸化部位と推測されるセリンをアラニンに変えた。PU.1発現ベクターを5種類作製した。現在、これらについて、CBP・mSin3Aとの結合、転写の活性化および抑制化能を検討中である。
今年度は、転写のコファクターCBP・mSin3Aに加えて、血液細胞分化に関わる転写因子との相互作用とPu.1の修飾制御についても解析を進めていく予定である。
|
Research Products
(4 results)
-
[Publications] Sakurai T. et al.: "Effects of overexpression of the Ets family transcription factor TEL on cell growth and differentiation of K562 cells."Int.J.Oncol.. 22. 1327-1333 (2003)
-
[Publications] Manabe N. et al.: "Prevention of PU.1-induced growth inhibition and apoptosis but not differentiation block in murine erythroleukemia cells by overexpression of CBP."Int.J.Oncol.. 22. 1345-1350 (2003)
-
[Publications] Suzuki M. et al.: "Direct association between PU.1 and MeCP2 that recruits mSin3A-HDAC complex for PU.1-mediated transcriptional repression."Oncogene. 22. 8688-8698 (2003)
-
[Publications] Yamada T. et al.: "Effects of PU.1-induced mouse calcium-calmodulin-dependent kinase I-like kinase (CKLiK) on apoptosis of murine erythroleukemia cells."Exp.Cell Res.. 294. 39-50 (2004)
