遺伝子導入を駆使した自家静脈グラフト内膜肥厚の制御

2005 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15591320
• Research Institution: Asahikawa Medical College
• Principal Investigator: 東 信良 旭川医科大学, 医学部, 講師 (30250559)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 笹嶋 唯博 旭川医科大学, 医学部, 教授 (20109515) ; 稲葉 雅史 旭川医科大学, 医学部, 助教授 (70151587) ; 羽賀 將衛 旭川医科大学, 医学部, 助手 (80271766)
• Keywords: 遺伝子治療 / NFkB / デコイ / 静脈グラフト / 内膜肥厚

Research Abstract

昨年度は、イヌ伏在静脈グラフトを採取して大腿動脈を置換する自家静脈グラフト移植モデルにおいて、(1)炎症性サイトカインに深く関与する転写因子NFkB活性化を証明し、(2)そのNFkBデコイオリゴヌクレオチド(NFkB ODN)導入実験を行い、移植後1ヶ月のイヌ静脈グラフトの内膜肥厚がNFkB ODN導入により抑制されることを明らかにした。
本年度は、同じモデルを用いて、NFkB ODNの内膜肥厚抑制における作用機序を明らかにすべく、以下の実験を行った。
(1)静脈グラフトへのNFkB ODN導入モデルにおけるNFkB活性化の抑制の証明
まず、確実にNFkB ODNが目的とする効果を発揮していることを確認するために、NFkB ODN導入後のグラフトを採取して、核内蛋白を抽出し、Gel shift assayを行い、NFkB活性を解析した。その結果、静脈グラフトにおいてNFkB ODNは、細胞内でNFkBの活性化を有意に抑制し、有効に作用していることが証明された。
(2)同モデルにおけるNFkBのdown streamの抑制効果の評価
NFkBは、炎症やストレス応答における各種遺伝子発現に関する転写因子であることから、炎症性サイトカインやアポトーシス関連の蛋白のmRNA発現や蛋白発現をみることで、NFkB下流の反応に対する効果を解析した。その中で、ICAM-1は、構成的に血管内皮細胞に発現し、炎症性サイトカインによって発現誘導されて高発現することが知られているている接着因子であるが、静脈グラフト移植モデルにおいて、術後早期にmRNA発現が亢進するのに対し、NFkB ODN投与群においては、ICAM-1のmRNA発現が有意に抑制されることが明らかとなり、NFkB ODN導入による内膜肥厚抑制作用の一翼を担っている可能性が示唆された。
また、アポトーシスに関しては、組織標本において、アポトーシス陽性細胞数を評価しているが、検体間のばらつきが多く、さらなる解析を必要とする。
今後、現在、米国で臨床研究が行われているE2F decoyとの比較を行って、NFkB decoyの内膜肥厚における効果の機序の解析をさらに進めてゆく予定である。