癌細胞増殖を制御するCa2+透過性チャネルの機能解析

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15591327
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 長澤 雅裕 群馬大学, 生体調節研究所, 助手 (50343083)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小島 至 群馬大学, 生体調節研究所, 教授 (60143492)
• Keywords: TRPVファミリー / 癌 / 増殖因子 / トランスロケーション

Research Abstract

1.癌細胞株で発現しているチャネル分子の検討:TRPV2チャネル分子がさまざまなヒト癌細胞株に発現していることを確認して、そのヴァリアントを同定した。さらに、その他のTRPVファミリーの発現を網羅的に検討して、どのタイプのTRPVがどのような癌細胞株に発現しているのか検討した。そし、それらのクローニングを行いシークエンスで確認を行った。2.チャネル分子の機能解析:CHO細胞にインスリンレセプターを発現させ出た細胞株にTRPV2を強制発現させるとインスリン刺激によりTRPV2が細胞膜にトランスロケーションして細胞内のCa^<2+>の流入がおこることを確認している。そこで、細胞内の局在および刺激に対しての変化を詳細に検討するために、TRPV2およびそのヴァリアントと蛍光タンパク質との癒合蛋白発現ベクター(V2-EGFP, V2 variant-EGFP)をつくった。living cellsにおいてチャネル癒合蛍光蛋白の細胞内局在をモニターした。血清等の刺激により、チャネル癒合蛍光蛋白が形質膜へのトランスロケーションをおこし、細胞内カルシウムの上昇を起こすダイナミックな動態を捕らえることに成功した。3.細胞増殖因子受容体とTRPV2チャンネル蛋白との関連性:インスリン受容体インスリン様増殖因子受容体の発現ベクターと異所性にTRPV2を強制発現させた種々の安定細胞株(TRPV2-cell lines)を作製した。CHO細胞にTRPV2を恒常的に発現させると形質膜に変化を認めるようになり、細胞骨格の制御機能とこのチャネル分子との関連性が示唆された。さらに、その機序を解析するために内在性にTRPV2を発現している細胞やまた、異所性にTRPV2を発現させたTRPV2-cell linesを用いて膜受容体刺激による細胞内カルシウムの上昇、TRPV2のトランスロケーション、細胞形態の変化との関連性について検討を続けている。