2003 Fiscal Year Annual Research Report
腫瘍抗原遺伝子・サイトカイン遺伝子導入樹状細胞を用いた癌ワクチン療法の基礎研究
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15591354
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
岩橋 誠 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (70244738)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
谷 眞至 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (60236677)
山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (20191190)
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| Keywords | CEA / GM-CSF / IL-12 / 樹状細胞(DC) / adenovirus vector / transgenic mouse / 成熟化(maturation) |
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| Research Abstract |
本年度はCEAcDNAをcarryするplasmid pL107.1よりCOS-TPC法にてヒトCEA発現adenovirus vector AxCACEAを作製した.マウスGM-CSF発現Ad vector AxCAGM-CSFとマウスIL-12発現Ad vector AxCAIL-12を増殖再調整した.これらを用いてマウス樹状細胞(DC)に関する基礎研究を行った.CEAtransgenic mouse C57BL/6(TgCEA)の大腿骨,脛骨より骨髄細胞を採取しDCを誘導し,DCの細胞表面マーカーをflow cytometryにて確認した.またTgCEAの各臓器別のCEA発現をRT-PCRにて確認した.続いて,誘導したDCにAxCACEA,AxCAGM-CSF,AxCAIL-12を遠心法にて感染させ,導入効率を確認した.またマウスDCのLPSによる成熟度とAd vector感染によるDCの機能解析を行った.TgCEAは大腸にのみCEAmRNA発現がみられ,小腸,肝,脳等の臓器には発現していなかった.DCの細胞表面抗原をFACSにて検討すると,CD11c(+),CD40(-),CD80(+),CD86(-),MHCclassI(+),MHCclassII(+)と未熟樹状細胞が誘導された.CEAのDCへの導入効率はFACSにて100MOIで十分でありoptimum doseとした.GM-CSFおよびIL-12はELISAにてMOI依存性に導入効率が上昇した.LPSにて未熟DCは成熟化し,それはAd-vector感染で増強されることがIFN-γとIL-12のELISAから考えられた.またFACSにてAd vector感染後にDCのCD40やCD80,CD86の発現増強が認められやはり成熟化が考えられた.現在CEA遺伝子+サイトカイン遺伝子導入DCを用いたCEA特異的CTLを誘導中である.
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Ueda K et al.: "Improvement of carcinoembryonic antigen-specific prodrug gene therapy for experimental colon cancer"Surgery. 133. 309-317 (2003)
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[Publications] Nakamori M et al.: "Intensification of antitumor effect by Th1-dominant adoptive immunogene therapy for advanced orthotoplic colon cancer."Clin Cancer Res. 9. 2357-2365 (2003)
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[Publications] Nakamori M et al.: "Effective therapy of metastatic ovarian cancer with an oncolytic herpes simplex virus incorporating two menvrane fusion."Clin Cancer Res. 9. 2723-2733 (2003)
