2003 Fiscal Year Annual Research Report

ユーイング肉腫に対するアンチセンス療法の確立と臨床応用に関する研究

Research Project

Project/Area Number	15591586
Research Institution	Kyushu University
Principal Investigator	田仲和宏九州大学, 大学病院, 助手 (10274458)
Keywords	Ewing肉腫 / EWS-Fli1 / 融合遺伝子 / アンチセンスオリゴ / 分子標的治療
Research Abstract	Ewing肉腫(ES)は、骨軟部悪性腫瘍の中で最も生命予後不良な腫瘍である。ESの90%以上の症例で染色体転座t(11:22)(q24:q12)がみられ、その結果、異常な融合遺伝子EWS-Fli1が生じる。この融合遺伝子産物は強力な転写因子として働き、正常線維芽細胞をtransformする活性を有することが知られており、異常な転写因子EWS-Fli1はESの発がん原因そのものと考えられている。我々は、ES細胞株を用いEWS-Fli1融合遺伝子発現と増殖能との間に正の相関があり、EWS-Fli1融合遺伝子はESの癌化のみならず、その生物学的性質をも規定している可能性があることを示してきた。さらに我々は、EWS-Fli1は癌抑制遺伝子Rbに関わる細胞周期制御因子を標的とし、Rb経路を阻害することがES発がんに深く関与していることを明らかにした。これまでの研究結果から、EWS-Fli1の持続的発現がESの増殖などの悪性形質維持に必須であることが示唆される。一方、すでに欧米では、各種の癌患者を対象に、アンチセンスオリゴ(AS)を用いて特定の遺伝子発現を抑制する遺伝子治療が行われている。それらのASは核酸医薬品として開発されており、すでに臨床治験も行われている。これらの知見をふまえ、本研究の目的は、EWS-FIi1発現を効率よく抑制しうるASを設計し、そのES細胞の増殖、転移などの悪性形質の抑制効果および抗癌剤との併用効果をin vitroおよびin vivoで検証し、ESの新しいAS療法の開発につなげることである。本年度においては以下の実験を行った。 1)EWS-Fli1 mRNA mRNAの高次構造をコンピューター解析し、ループが開いている部分を検索した。その部分はASが標的としやすいため重点的に、また、特異性が高いと思われるEWS-Fli1融合部分に対してもDNase耐性phosphorothioate ASを合成した。各種のES細胞株を用い、細胞増殖を最も効率よく阻害する、ASを選択した。 2)そのASによってEWS-Fli1の発現が抑制されていることを、ノーザンブロットおよびウエスタンブロットにより、mRNAレベルおよび蛋白レベルで確認した。また、EWS-Fli1を持たない正常線維芽細胞、などの細胞株で、ASによる増殖抑制効果や細胞毒性がないことを確認した。 3)ヌードマウスにES肉腫細胞株を移植して腫瘍を形成し、ASを投与してin vivoでも増殖抑制効果があることを確認した。以上によって、EWS-Fli1を標的とした核酸医薬品となりうるASが決定した。今後、このASを用いて、最も有効な投与経路、抗癌剤との併用効果、等を検討し、臨床応用に向けた研究を展開する予定である。

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Nakatani F, et al.: "Identification of p21(WAF1/CIP1) as a direct target of EWS-Fli1 oncogenic fusion protein"J.Biol.Chem.. 278. 15105-15115 (2003)
[Publications] Saito T, et al.: "PTEN/MMAC1 gene mutationis a rare event in soft tissue sarcomas without specific balanced translocations"Int.J.Cancer. 104. 175-178 (2003)
[Publications] Ayyanathan K, et al.: "Regulated recruitment of HP1 to a euchromatic gene induces mitotically heritable, epigenetic gene silencing : a mammalian cell culture model of gene variegation"Genes Develop.. 17. 1855-1869 (2003)
[Publications] Harimaya K, et al.: "Primitive neuroectodermal tumor and extraskeletal Ewing's sarcroma arising primarily in the spinal canal"Spine. 28. 408-412 (2003)
[Publications] Oda Y, et al.: "Altered expression of cell cycle regulators in myxofibrosarcoma, with special emphasis on their prognostic implications"Hum.Pathol.. 34. 1035-1042 (2003)
[Publications] Matsunobu T, et al.: "The prognostic and therapeutic relevance of p27Kip1 in Ewing's family tumors"Clin.Cancer Res.. (In Press). (2004)
[Publications] 田仲和宏, 他(分担執筆): "別冊整形外科No.43 骨軟部腫瘍の診断と治療-21世紀への展開"南江堂. 230 (2003)

2003 Fiscal Year Annual Research Report

ユーイング肉腫に対するアンチセンス療法の確立と臨床応用に関する研究

Principal Investigator

田仲 和宏 九州大学, 大学病院, 助手 (10274458)

Research Products

[Publications] Nakatani F, et al.: "Identification of p21(WAF1/CIP1) as a direct target of EWS-Fli1 oncogenic fusion protein"J.Biol.Chem.. 278. 15105-15115 (2003)

[Publications] Saito T, et al.: "PTEN/MMAC1 gene mutationis a rare event in soft tissue sarcomas without specific balanced translocations"Int.J.Cancer. 104. 175-178 (2003)

[Publications] Ayyanathan K, et al.: "Regulated recruitment of HP1 to a euchromatic gene induces mitotically heritable, epigenetic gene silencing : a mammalian cell culture model of gene variegation"Genes Develop.. 17. 1855-1869 (2003)

[Publications] Harimaya K, et al.: "Primitive neuroectodermal tumor and extraskeletal Ewing's sarcroma arising primarily in the spinal canal"Spine. 28. 408-412 (2003)

[Publications] Oda Y, et al.: "Altered expression of cell cycle regulators in myxofibrosarcoma, with special emphasis on their prognostic implications"Hum.Pathol.. 34. 1035-1042 (2003)

[Publications] Matsunobu T, et al.: "The prognostic and therapeutic relevance of p27Kip1 in Ewing's family tumors"Clin.Cancer Res.. (In Press). (2004)

[Publications] 田仲 和宏, 他(分担執筆): "別冊整形外科No.43 骨軟部腫瘍の診断と治療-21世紀への展開"南江堂. 230 (2003)

田仲和宏九州大学, 大学病院, 助手 (10274458)

[Publications] 田仲和宏, 他(分担執筆): "別冊整形外科No.43 骨軟部腫瘍の診断と治療-21世紀への展開"南江堂. 230 (2003)