子宮内膜組織再構築機構の解析と子宮内膜再生療法の臨床応用に向けての基礎的研究

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15591773
• Research Institution: Wakayama Medical University
• Principal Investigator: 梅咲 直彦 和歌山県立医科大学, 医学部, 教授 (20106339)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 帽子 英二 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 ; 尾谷 菜緒子 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 (80343424) ; 田中 哲二 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教授 (80275255) ; 八木 重孝 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手
• Keywords: 幹細胞 / 子宮内膜 / 子宮内膜間質細胞 / 子宮内膜症 / 子宮腺筋症

Research Abstract

複数のヒト正常子宮内膜細胞の試験管内培養実験から限界希釈法により多数の単細胞由来細胞を樹立した。この細胞は体外で特別な増殖因子を投与せずとも2年間以上も増殖を続けており、極めて自己増殖能力の高い細胞である。今年度は、この幹様細胞の細胞生物学的性状を明らかにし、子宮内膜自己再生療法のための条件を検討した。
(1)ヒト子宮内膜幹様細胞の細胞生物学的性状解析:正所性子宮内膜組織由来の幹様細胞は形態学的に多様で、単独細胞の培養形態は安定しており、子宮内膜組織が複数の未熟細胞の集団と証明された。しかし異所性に類子宮内膜組織が発生する子宮内膜症組織や子宮腺筋症組織から樹立した長期生存細胞が形態的に均一であった事実は、子宮内膜症や子宮腺筋症が幹様細胞レベルで遺伝子変異し、モノクローナルな発育をしたと考えられた。
(2)ヒト子宮内膜幹様細胞の試験管内増殖分化誘導実験と子宮内膜細胞の分化系統樹の作成:子宮内膜細胞の細胞系譜マーカーの発現変動をフローサイトメトリー解析し、子宮内膜細胞分化系統樹作成を試みてきた。セルソーターで選択的細胞分取を行い、選別細胞のin vitro分化誘導能も検証している。
(3)green mice細胞を用いたマウス子宮内膜再構築機構の解析:green mice由来マウス子宮内膜幹細胞の単離をin vitroで試みている。
(4)ヒト子宮内膜幹様細胞のマウス子宮内移植による子宮内膜再生療法の確立:免疫不全マウスにおけるヒト子宮内膜組織の再構築実験では、複数種の幹様細胞が相互作用を保持した状態で移植されないと内膜組織再構築が困難であることを実験的に証明した。現在は、in vitroとin vivoで各種生理活性物質の関与を検証している。
(5)ヒト子宮内膜幹様細胞特異抗原の同定:単離子宮内膜幹様細胞でマウスを免疫し抗幹細胞モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを樹立している最中である。

Research Products

• [Publications] Tanaka T, et al.: "Cellular Heterogeneity in Long-Term In-Vitro-Cultured Human Endometrial Cells."J Fertilization & Implantation. 20. 65-68 (2003)
• [Publications] Tanaka T, et al.: "Cellular heterogeneity in long-term surviving cells isolated from eutopic endometrial, ovarian endometrioma and adenomyosis tissues."Oncology Reports. 10. 1150-1160 (2003)
• [Publications] Tanaka T, Umesaki N: "Endometriotic patient serum enhances endometrial stromal cell proliferation and viability : a preliminary study."International Journal of Molecular Medicine. 12. 103-108 (2003)
• [Publications] Tanaka T, et al.: "Leptin inhibits decidualization and enhances cell viability of normal human endometrial stromal cells."International Journal of Molecular Medicine. 12. 95-98 (2003)
• [Publications] Tanaka T.Umesaki N: "Fas antigen (CD95) mediates cell survival signals to regulate functional cellular subpopulations in normal human endometrial stromal cells."International Journal of Molecular Medicine. 11. 757-762 (2003)
• [Publications] Tanaka T, Umesaki N: "Regulation of the functional subpopulations of normal human endometrial stromal cells by Macrophage Colony-Stimulating Factor."International Journal of Molecular Medicine. 11. 617-620 (2003)