2003 Fiscal Year Annual Research Report
BH3-only蛋白BADのアポトーシス誘導機構の解析
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15603004
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
安達 正晃 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (70240926)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
今井 浩三 札幌医科大学, 医学部, 教授 (60117603)
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| Keywords | BH3-only蛋白 / BAD / Akt / アノイキス / ミトコンドリア / アポトーシス |
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| Research Abstract |
1.BAD変異体の作製
我々は、BH3領域におけるアミノ酸-残基の置換したBAD変異体を作製した。この変異体は、低リン酸化状態にあり、Bcl-2との結合能を失っているが、Bcl-XLとは結合でき、アポトーシス誘導能はAktにても抑制されないことが判明した。この変異体に新たな変異を加えて、Bcl-XLとの結合能を損なう変異体を作製した。一方、BH3ドメインの中で最も良く保存されているロイシン残基のアラニンへの置換によってBcl-XLへの結合能が失われることは判明しているが、それ以外の変異体を多種作製した。その結果、ロイシン残基をバリンへ置換するとこれのみでは、BADの機能は保たれるが、アスパラギン酸をグリシンへ変異させることにより、BADの機能が失われることが判明した。ロイシンとアスパラギン酸の両者がBcl-XLとの結合に重要であることが判った。
2.BAD融合蛋白を利用したTOF-mass
GST-BAD融合蛋白を用いて、HeLa細胞やHEK293細胞中に存在するBAD結合蛋白をPull-downし、SDS-PAGE上で見出されるバンドよりTOF-massによってその結合蛋白質の同定を目指しているが、これまでのところ、既知の結合蛋白であるBcl-XL及びそのファミリー分子のみが得られている。引き続き、新しいBAD結合蛋白の同定を試みている。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Masaaki Adachi: "Synergistic Effect of Histone Deacetylase Inhibitors FK228 and CBHA with Proteasome Inhibitors PSI and PS-341 against Gastrointestinal Adenocarcinoma Cells"Clin.Cancer Res.. In press. (2004)
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[Publications] Yubin Zhang: "Histone Deacetylase Inhibitors FK228, MS-275 and CBHA Augment Radiation -Induced Cell Death in Gastrointestinal Adenocarcinoma Cells"Int.J.Cancer. In press. (2004)
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[Publications] Masaaki Adachi: "Mutation of BAD within the BH3 domain impairs its phosphorylation-mediated regulation."FEBS Lett.. 551. 147-152 (2003)
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[Publications] Masashi Idogawa: "Overexpression of BAD preferentially augments anoikis."Int.J.Cancer. 107. 215-223 (2003)
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[Publications] Hiroshi Yasui: "Combination of tumor necrosis factor-α with sulindac augments its apoptotic potential and suppresses tumor growth of human carcinoma cells in nude mice."Cancer. 97. 1412-1420 (2003)
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[Publications] Atsushi Takamura: "Accumulation of Hsp70/Hsc70 molecular chaperone regulator BAG-1 on COPI-coated structures in gastric epithelial cells."Int.J.Oncol.. 23. 1301-1308 (2003)
