2003 Fiscal Year Annual Research Report
筋肉組織特異的血管内皮前駆細胞を用いた血管再生療法の開発
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15609005
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| Research Institution | Tokai University |
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Principal Investigator |
増田 治史 東海大学, 医学部, 講師 (50278496)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岩畔 英樹 東海大学, 医学部, 助手 (60366002)
玉木 哲朗 東海大学, 医学部, 講師 (10217177)
浅原 孝之 東海大学, 医学部, 教授 (20246200)
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| Keywords | 血管内皮前駆細胞 / 血管再生 / 細胞療法 / 虚血性疾患 / 筋肉組織特異的幹細胞 |
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| Research Abstract |
1.目標;筋肉組織内のsk34細胞を、再現性よく血管内皮前駆細胞から血管内皮系細胞にcommitmentさせ、分化させる培養法の確立に重点を置いた。
2.方法及び結果;
(1)34細胞の筋肉組織よりの採取;野生型C57BL6Jの下肢筋肉を摘出した。摘出された筋肉を酵素処理を行い、単細胞にしたのち、CD34及びCD45の表面抗原をマーカーにて染色し、FACS vantageにて、血液系由来幹細胞以外のCD45陰性細胞のうち、幹細胞マーカーCD34陽性細胞(sk34細胞)を採取した。1匹の両側下肢骨格筋より、約1〜2×10^5個のsk34細胞が採取され、以下の培養に供した。
(2)管幹細胞への分化誘導培養;sortingされたsk34細胞を用いて、血管内皮細胞系へのcommitment能を確認すため半固形(メチルセルロース)培養及び液体培養を行った。(半固形培養);VEGF 20ng/ml, basic FGF 20ng/ml,15% FCS含有培地にて培養を行った。培養後、10日にて、筋肉細胞からなるコロニー以外に、敷石状内皮様の細胞からなるコロニーが形成された。この内皮細胞様コロニーにおいて内皮細胞に特徴的なacetylated LDL-DiIの取り込み及びisolectin B4による細胞表面の染色が蛍光顕微鏡にて確認された。(液体培養);VEGF 20ng/ml, basic FGF 20ng/ml,15%FCS含有IMDM培地においても、同様に培養2週目頃より、上記内皮細胞様コロニーが確認できた。
3.考察;sk34細胞より内皮系細胞への分化を確認した。次年度は、内皮細胞様コロニーの増幅及び単離を行い、in vivo虚血マウスモデルへ移植し、虚血改善効果を評価する。
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