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2004 Fiscal Year Annual Research Report

エンドサイトーシス小胞形成のリアルタイム観察

Research Project

Project/Area Number 15657028
Research InstitutionOkayama University

Principal Investigator

竹居 孝二  岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (40322226)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 山田 浩司  岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (80325092)
Keywordsエンドサイトーシス / 小胞輸送 / 無細胞系 / ライブイメージグ / リポソーム / ダイナミン / アンフィファシジン
Research Abstract

1)小胞形成に伴う膜形態変化のリアルタイム観察
超高速共焦点レーザー顕微鏡下で、蛍光脂質でRhodamineラベルしたphosphatidylethanolamineを含む単層大型のリポソームを脳細胞質、ATP, GTPと反応させ、小胞形成のライブイメージを観察した。その結果、リポソーム表面からの突起形成と、形成された突起の凝集によると思われる蛍光ラベルの凝集がリポソーム表面で観察された。また、同様に蛍光ラベルした単層大型のリポソームを、牛脳より精製したdynaminおよび大腸菌で発現精製したAmphiphysinと反応させることにより、明瞭なチューブ状突起の形成が観察された。
2)Amphiphysinの機能解析
小胞形成に関与するAmphiphysin 1について、ノックアウトマウスの脳細胞質や、大腸菌で発現精製したAmphiphysin 1を用いて機能解析を行った。その結果Amphiphysin 1がDynamin 1の膜への結合とGTPアーゼ活性を増強して、小胞形成を増加させることを明らかにした。この効果にはAmphiphysin 1のBARドメインとSH3ドメインが必要であることをtruncation mutantを用いて明らかにした。またAmphiphysin 1のDynaminGTPアーゼ活性を増強効果には単層大型のリポゾームの存在が必要であった。以上より、Amphiphysin 1がDynaminを調節し、小胞形成を行う機構を提唱した。

  • Research Products

    (5 results)

All 2005 2004

All Journal Article (5 results)

  • [Journal Article] Regulatory mechanisms of dynamin-dependent endocytosis2005

    • Author(s)
      K.Takei
    • Journal Title

      J Biochemistry 137

      Pages: 2005

  • [Journal Article] Immunohistochemical localization of Klotho protein in brain, kidney, and reproductive organs of mice2004

    • Author(s)
      S-A.Li
    • Journal Title

      Cell Structure and Function 29

      Pages: 91-99

  • [Journal Article] Dynamin-2 regulates oxidized low-density lipoprotein-induced apoptosis of vascular smooth muscle cell2004

    • Author(s)
      Y.Kashiwakura
    • Journal Title

      Circulation 110

      Pages: 3329-3334

  • [Journal Article] The stimulatory action of amphiphysin on dynamin function is dependent on lipid bilayer curvature2004

    • Author(s)
      Y.Yoshida
    • Journal Title

      EMBO Journal 23

      Pages: 3483-3491

  • [Journal Article] ダイナミンとエンドサイトーシス2004

    • Author(s)
      竹居孝二
    • Journal Title

      蛋白質 核酸 酵素 増刊『細胞における蛋白質の一生』 49

      Pages: 938-941

URL: 

Published: 2006-07-12   Modified: 2016-04-21  

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