天疱瘡自己抗体の病的活性測定法の開発

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15659266
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 天谷 雅行 慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (90212563)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 西川 武二 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50051579)
• Keywords: 自己抗体 / 自己免疫 / 細胞間接着 / デスモグレイン / 天疱瘡 / 血清学的検査 / 培養細胞 / ケラチノサイト

Research Abstract

本研究の目的は、培養表皮細胞を用いて、天疱瘡患者血清中に存在する自己抗体による細胞間接着阻害能をin vitroの系で評価できる測定法を開発する。
本年度は、正常ヒト表皮由来ケラチノサイトをシート状に培養し、抗Dsg3モノクローナル抗体、あるいは患者血清を添加後、細胞シートをピペッティングによる機械的ストレスを加え、分断された細胞集塊数を計測し、細胞接着阻害活性の指数(Dissociation Score : DS)を得た。天疱瘡モデルマウスより単離されたモノクローナル抗Dsg3抗体を用いて検討したところ、明らかに病的活性を持つ抗体AK23で処理をした細胞シートは、多数の細胞塊に分断されたのに対し、マウスモデルで明らかな病的活性を示さない抗体AK20で処理した細胞シートは分断されなかった。次に、患者血清を用いて検討したところ、活動期の天疱瘡患者血清(n=10)の平均DSは42.2、正常人血清(n=5)の平均DSは、15.6であり、有意に患者血清は高いDS値を示した。さらに、Dsg3 ELISA値が同程度で、活動期の患者血清(n=3)、寛解期の患者血清(n=3)を比較すると、活動期の患者血清において、DS値は、27〜60と高値を示したのに対し、寛解期の患者血清におけるDS値は10〜20と低値を示しELISA値よりも病勢を正確に反映する値が得られた。
平成16年度は、マウス表皮由来の初代培養を用いて、同様に病的活性測定系の確立を行う。天疱瘡モデルマウスより得られた複数のモノクローナル抗体を本アッセイを用いて病的活性の順位付けを行い、病的活性を決定している分子レベルの因子を検討する。

Research Products

• [Publications] Amagai M: "Desmoglein as a target in autoimmunity and infection"J Am Acad Dermatol. 48. 244-252 (2003)
• [Publications] Ota T, Amagai M, Watanabe M, Nishikawa T: "No involvement of IgG autoantibodies against extracellular domains of desmoglein 2 in paraneoplastic pemphigus or inflammatory bowel diseases."J Dermatol Sci. 32. 137-141 (2003)
• [Publications] Futei Y, Amagai M, Hashimoto T, Nishikawa T: "Conformational epitope mapping and IgG subclass distribution of desmoglein 3 in paraneoplastic pemphigus"J Am Acad Dermatol. 49. 1023-1028 (2003)
• [Publications] Shimizu A, Ishiko A, Ota T, Tsunoda K, Amagai M, Nishikawa T: "IgG binds to desmoglein 3 in desmosomes and causes a desmosomal split without keratin retraction in a pemphigus mouse model."J Invest Dermatol. (in press). (2004)
• [Publications] Amagai M: "Dermatology"Harcourt Health Sciences. 449-462 (2003)